[发明专利]破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中的高效表达及应用有效
| 申请号： | 200910135972.0 | 申请日： | 2009-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN101880675A | 公开（公告）日： | 2010-11-10 |
| 发明（设计）人： | 陈薇;于蕊;侯利华;于长明;刘树玲;任军;房婷 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C07K14/33;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/00;C12P21/02;A61K39/08;A61P31/04;C12R1/145 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种通过核苷酸序列优化使破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中获得高效可溶性表达的方法。根据国内破伤风梭菌C.Tetani强毒株CMCC64008株的测序结果，对破伤风毒素受体结合区Hc序列进行分析优化，优化后的序列如SEQ ID No.1，其编码的蛋白序列如SEQ ID No.2。合成后的Hc基因经双酶切后连接入表达载体pET32a(+)中，重组Hc在大肠杆菌中获得了可溶性高表达，目的蛋白占碎菌上清总蛋白的约46％。经QFF柱、苯基疏水柱和SP柱三步纯化后，目的蛋白纯度可达95％以上，得率在300mg/L以上。通过本发明的方法制备的重组蛋白具有很好的免疫原性，能够诱导小鼠产生高滴度保护性抗体，抵御高剂量致死毒素的攻击。本发明在破伤风毒素重组亚单位疫苗Hc的大规模高效制备中具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 破伤风 毒素 受体 结合 hc 大肠杆菌 中的 高效 表达 应用 | ||
【主权项】：
破伤风毒素受体结合区Hc基因，是下述核苷酸序列之一：1)序列表中SEQ ID No.1的DNA序列；2)编码序列表中SEQ ID No.2的DNA序列；3)与序列表中SEQ ID No.1限定的DNA序列具有90％以上同源性且具有激发机体对破伤风毒素产生免疫保护作用的核苷酸序列；4)在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No.1限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。
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