[发明专利]一种绿茶糖蛋白的质量控制方法

摘要

本发明涉及天然产物的质量控制领域，具体涉及应用傅立叶红外二阶导数光谱结合向量夹角余弦方法对绿茶中提取的阿拉伯半乳聚糖蛋白进行有效的质量监控，该方法是通过傅立叶红外二阶导数光谱分析获得构成绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的两种主要单糖组分阿拉伯糖和半乳糖的特征峰；将向量夹角余弦方法应用于绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱的比对，获得绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的傅立叶红外光谱二阶导数光谱图谱可变区、保守区和相似度，从而能够对绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白产品进行快速有效的鉴定和质量控制。

主权项

1.绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白质量控制方法包括：绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取、建立标准的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱、将待测样品的红外二阶导数指纹图谱与标准品的比对，其特征是：(1)绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白标准品的获取方法：绿茶叶45℃烘干后，打磨成粉末后用80％乙醇浸提其中的色素和多酚类物质后，45℃烘干，以1∶20(w/v)料水比75℃，水浸提1h。浸提液经过过滤再400g离心10min，获得的上清液经冷冻干燥后得到绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白粗品，在阴离子柱Q Sepharose FastFlow column(20mm×60cm)，pH 8.0下NaCl梯度洗脱，收集第二洗脱峰中主要多糖组分，进一步经过分子筛凝胶层析柱Sephadex G100column(16mm×60cm)分离纯化，收集其中的多糖成分即为绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白。(2)标准的绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白的红外二阶导数指纹图谱建立方法：绿茶阿拉伯半乳聚糖蛋白置于40℃烘箱直至重量为恒重，取2mg加入到200mg KBr中研磨，压制成1mm的片层，在配有DTGS检测器的Nicolet NEXUE470红外光谱仪上收集红外图谱。红外二阶导数图谱使用OMNIC ESP V6软件获得。(3)比较样品与标准品的红外二阶导数光谱间的相似度的方法为向量夹角余弦法：向量夹角余弦(余弦相似度)方法是一种利用两向量间的夹角余弦值来比较向量间的相似度的数学方法。其主要原理如下：假设X是n维向量，由(x1，x2，x3，....，xn)表示，Y是另一n维向量，由(y1，y2，y3，....，yn)表示。X与Y的内积X·Y＝x1y1+x2y2+x3y3+.....+xn yn，X的模|X|＝(x12+x22+x32+....+xn2)1/2，Y的模|Y|＝(y12+y22+y32+....+yn2)1/2。向量X与向量Y的夹角余弦为：$\cos \mathrm{\θ}=\frac{X\·Y}{\left|X\right|\·\left|Y\right|}=\frac{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{x}_i\·y_i}{\sqrt{\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{x}_i^2\·\underset{i=1}{\overset{n}{\mathrm{\Σ}}}{y}_i^2}}$cosθ值越接近1，表明向量X与向量Y的相似度越高。应用于红外光谱分析则每个光谱指纹图谱都可以看作一组对应波数下的峰高(或峰面积)的数值，可以把这组数值看作多维空间中的向量，这样两个指纹图谱间相似性的问题转化为多维空间的两个向量的相似性问题，利用上式能够定量表征指纹图谱间的相似性。