[发明专利]临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和储存

摘要

本发明涉及一种临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和储存，其制备方法如下：冲洗脐带，将脐带剪切至颗粒状，置于含2％庆大霉素的生理盐水中，离心，悬浮，离心，培养10天，按1∶3传代，传至4～5代，可获得大量间充质干细胞，加入冻存液后置于液氮中保存，液氮冷冻温度为-196℃。

主权项

1.一种脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下取正常顺产或剖腹产者胎儿脐带，用含2％庆大霉素的生理盐水反复冲洗，去除残留血迹；(2)将脐带置于含2％庆大霉素的生理盐水中，用无菌剪刀将其剪切至约颗粒状，组织块置于50ml离心管内，高速离心，离心机转速为2000转/分钟，离心10分钟，弃掉上清，重新加入含2％庆大霉素的生理盐水，将沉淀的组织块充分振荡，使之松散，高速离心，离心机转速为2000转/分钟，离心10分钟；(3)将步骤2所获的组织块用含10％胎牛血清的DMEM培养基悬浮，充分振荡后高速离心，离心机转速为2000转/分钟，离心10分钟；(4)将步骤3获得的组织块沉淀均匀种植于塑料细胞培养瓶中，置于5％CO2培养箱中，待组织块完全贴壁后，补加含10％胎牛血清的DMEM培养基；(5)于培养第10天在倒置显微镜下观察到组织块周围出现贴壁、梭型或多角型细胞时，将组织块全部吸出，补加含10％胎牛血清的DMEM培养基，置于5％CO2培养箱中继续培养1周；(6)待细胞80％融合，用0.25％胰酶消化，按1∶3传代；(7)经14～15天扩增后，细胞传至4～5代，得到间充质干细胞。