[发明专利]一种延长大麦白粉病菌株保存期的方法

摘要

本发明公开了一种延长大麦白粉病菌株保存期的方法，属于作物病原菌保存方法的技术领域。该方法包括：(1)单孢菌株的采集与扩繁；(2)感病大麦品种试管苗的培育；(3)大麦试管苗的接种与培养；(4)大麦白粉病菌株的保存与转接等步骤。本方法能显著延长大麦白粉病菌株的保存期，由常规方法的8-10天延长至60-70天；并能克服容易产生交互感染，导致一些特定致病型菌株的丢失及操作烦琐、耗费人力、物力较大等的缺陷，以确保大麦白粉病病原菌相关研究工作的正常开展。本发明可以在大麦病害研究与育种机构中推广应用。

主权项

1、一种延长大麦白粉病菌保存期的方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)单孢菌株的采集与扩繁：于菌株采集前8-10天先播种广谱高感大麦白粉病菌品种至二叶一心期，备用；从田间采集带有单个或多个清晰菌丝体而尚无孢子产生的叶片，将该叶片剪成单段或多段各带有单个单孢菌落长2-3cm的叶段，并按带菌面朝上各放入一只盛有保鲜剂的培养皿中、加盖，在18-22℃、自然光照下，培养1-2d至单孢菌落产生分生孢子；另取上述广谱高感大麦白粉病菌品种植株的第一叶剪成长2-3cm的新鲜叶段，按一段/每皿放入盛有同上保鲜剂的培养皿中；在超净工作台隔离条件下，将上述已产生分生孢子的叶段按一皿/一段，置于新鲜叶段的上方、敲打几下后，加盖；将接种后培养皿放入光照培养箱内，于16-18℃，相对湿度90％-95％，每天16h，2500-3000lx光照条件下进行扩繁培养8-10d，至有大量分生孢子产生，备用；(2)感病大麦试管苗的培育：将广谱高感大麦白粉病菌品种种子，用蒸馏水浸种后，滤干，18℃培养24小时至发芽，备用；另准备一批长28厘米、直径5厘米，底部设有0.5厘米小孔，管口分别制作成可匹配对接的直口与翻口的试管，备用；将灭菌后营养土盛入管口形状相同的试管中，至每支试管管长的1/4，营养液浇透，放入8-10粒发芽大麦种子/支试管后，再盖上薄层营养土，用无菌膜封口；经18-22℃培育8-10天至麦苗2叶1心期，备用；(3)大麦试管苗的接种与培养：取步骤(2)试管苗垂直置于超净工作台上，先用营养液喷湿叶片，再用镊子夹住步骤(1)扩繁后带有大量大麦白粉菌分生孢子的叶段，伸入试管口内，通过振动将孢子接种到试管苗上后，管口用无菌膜封住；放入光照培养箱内，于16-18℃，每天16h，2500-3000lx光照培养24h；每结束一支大麦试管苗的接种后用75％酒精对超净工作台进行灭菌，以防下一菌株接种时产生交互感染；(4)大麦白粉病菌株的保存与转接：将步骤(3)经接种、培养后的试管苗置于培养箱中，在5℃，每天16h，2500-3000lx光照下该菌种可生长、保存60-70天；一般保存至60天后，即将该感菌的试管苗拆封口并倒置，另取一支步骤(2)的管口形状与该感菌试管苗管口相匹配的大麦试管苗，置于其下方并将上下两试管管口相对接，通过振动将大麦白粉菌孢子转接到下方的试管苗上，管口用75％酒精灭菌后，用无菌膜封住；对超净工作台消毒后，在同上方式、条件下进行其它菌株的转接、培养与保存；如此循环，以实现实验室长久保存大麦白粉病菌株。