[发明专利]一种HIV侵染细胞的筛选系统及其应用

摘要

本发明提供了一种HIV侵染细胞的筛选系统。由报告蛋白基因一分为二成报告基因N端和报告基因C端，报告基因N端与具有蛋白剪接功能的DnaE内含肽N端基因部分dnae-N融合构成表达载体I；报告基因C端则与具有蛋白剪接功能的DnaE内含肽C端基因部分dnae-C融合构成表达载体II。将两个表达载体分别转染含趋化因子和CD4蛋白或者含HIV包膜蛋白Env的HEK293细胞或CHO细胞，并构建成稳定表达细胞株。当两株稳定细胞混合培养时，细胞发生融合，从而促使DnaE-C和DnaE-N能够相互接触作用，而由DnaE-N和DnaE-C共同作用把报告蛋白N端和报告蛋白C端连接成一个完整的报告蛋白，最后通过检测报告蛋白活性便可知细胞的融合程度。

主权项

1.一种HIV侵染细胞的筛选系统，包括趋化因子受体筛选细胞系和HIV包膜蛋白Env筛选细胞系，所述筛选系统由如下方法构建：(1)将DnaE内含肽基因的C端与报告基因的C端拼接，插入质粒1中获得融合表达载体1；将DnaE内含肽基因的N端与报告基因的N端拼接，插入质粒1中获得融合表达载体2；(2)将人CD4蛋白基因插入质粒2，获得重组表达载体3；将人趋化因子CCR5基因或CXCR4基因插入质粒1，获得重组表达载体4；(3)将HIV-1病毒株Env基因HXB2-env或SF162-gp160基因插入质粒3，获得重组表达载体5；(4)将载体1或载体2中的一个，与载体3和载体4共转染至HEK293细胞或CHO细胞，获得稳定表达的趋化因子受体筛选细胞系；(5)将载体1或载体2中的另一个，与载体5共转染至CHO细胞或HEK293细胞，获得稳定表达的HIV包膜蛋白Env筛选细胞系；所述报告基因为用于检测的有活性的酶基因或可发光的蛋白基因，所述的报告基因的C端与报告基因的N端拼接即为报告基因，所述质粒1、质粒2、质粒3为在哺乳动物细胞内高效表达蛋白的载体。