[发明专利]一种谷氨酰胺转氨酶制备方法

摘要

本发明提供了一种新的谷氨酰胺转氨酶制备方法，其步骤包括首先选择一株高产谷氨酰胺转氨酶转基因菌株，经过放大培养后接种4％量于种子培养基，30℃，210r/min培养24h后按8％接种量接入发酵培养基培养。发酵培养过程中采用分批补料发酵法培养，有效地解决了发酵过程中产物抑制作用和蛋白质交联反应等，还通过变温法缩短细胞生长延滞期，减少总发酵时间提高糖的利用率和谷氨酰胺转氨酶的发酵水平。最后，采用超滤-真空浓缩法分离和纯化谷氨酰胺转氨酶，通过该法制得的谷氨酰胺转氨酶酶活力高，产率高，操作比较简便，适用于工业化生产。

主权项

一种谷氨酰胺转氨酶制备方法，其特征包括以下几个步骤：(1)菌种选择选择了一株产谷氨酰胺转氨酶转基因菌株，该菌株是通过将来自茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶基因克隆分离后，构成该基因原核表达载体，并通过轮枝链霉菌表达。(2)菌种培育将斜面培养基上的菌种以4％的接种量接入种子培养基，于30℃，210r/min培养24h。(3)摇瓶发酵培养以8％的接种量，将种子培养基菌种接入发酵培养基，于32℃，210r/min培养18h，降低温度至28℃，培养24h。(4)补料发酵发酵液发酵24h时，补加1.5％甘油作为碳源，同时添加1.5％蛋白胨作为氮源培养18h。(5)谷氨酰胺转氨酶提取将发酵液以4000r/min离心20min，上清液为粗酶液，粗酶液经微滤膜微滤处理，进一步除去细菌等杂质，滤液再经超滤膜处理，截留得到的产物再经真空浓缩后，喷雾干燥得到纯的谷氨酰胺转氨酶。