[发明专利]一种酸性蛋白酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种酸性蛋白酶的制备方法。本发明采用复合酶制备原生质体，并通过UV诱变，筛选出的高产酸性蛋白酶菌株，在最佳优化的固体发酵培养基中发酵培养得到酸性蛋白酶液，并用混合盐析法处理得到高纯度的酸性蛋白酶。该方法操作简单、又节省成本，该法将在酸性蛋白酶的工业化大生产中有良好的应用前景。

主权项

一种酸性蛋白酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)诱变处理单孢子悬液制备：在斜面培养基上加入无菌水，用接种环刮取培养物表面的孢子，制成粗制的孢子悬液。将此悬液振荡20min，过滤悬液，制成孢子浓度约106个/ml的单孢子悬液，将孢子悬液涂布于平板培养。将平板培养好的菌丝体用1％组合酶于室温下处理，过滤离心收集原生质体，并调节原生质体浓度，用紫外诱变处理。(2)生产菌株的筛选将经诱变后的菌株培养，挑取菌落颜色淡化、形态异常或孢子丰满的菌株，斜面保存。将菌落初筛获得的变异菌株接种于初始发酵培养基中，摇瓶培养，选取多产酸性蛋白酶的突变菌株，进行下一步摇瓶复筛。选出酸性蛋白酶产量最高的菌株。(3)酸性蛋白酶的生成将摇瓶筛得到的菌株先经过种子培养，然后转入固体发酵培养基恒温发酵培养。发酵完毕后抽提后用氯化钠和硫酸铵混合盐析，后经干燥得到酸性蛋白酶。