[发明专利]应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法

摘要

本发明公开了一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法，属生物技术领域，首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；构建由pGAP调控β-葡萄糖苷酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；根据载体上所带的抗性基因筛选重组子作为工程菌株；将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中发酵工程菌分泌表达β-葡萄糖苷酶。本发明生产成本低，发酵周期短，利用毕赤酵母的pGAP调控表达的β-葡萄糖苷酶有利于产物的纯化，解决应用天然产β-葡萄糖苷酶的菌株生产β-葡萄糖苷酶的成本较高、产物难于纯化等的问题，有利于β-葡萄糖苷酶的大规模生产。

主权项

1、一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，其具体步骤如下：1)、首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；2)、构建由pGAP调控β-葡萄糖苷酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化为毕赤酵母基因组；3)、根据载体上所带的抗性基因筛选重组子作为工程菌株；4)、将工程菌株接种于含碳源的液体培养基中，于25～35℃在生物反应器中发酵工程菌1～2d分泌表达β-葡萄糖苷酶，在发酵过程中用氨水维持pH在4～6；所述液体培养基是由以下组分组成：85％磷酸25～28ml/L，CaSO4·2H2O 0.8～1.2g/L，K2SO4 17～19g/L，MgSO4·7H2O 13～16g/L，KOH 3.5～4.5g/L，碳源15～45g/L，蛋白胨18～22g/L，Yeast extract 8～12g/L，PTM4 3～5ml/L；所述PTM4是由以下组分组成：CuSO4·5H2O 1.5～2.5g/L，NaI·2H2O0.1～0.2g/L，MnSO4·H2O 2.5～3.5g/L，Na2MoO4·2H2O 0.1～0.3g/L，H3BO3 0.01～0.03g/L，CoCl2·6H2O 1.0～2.0g/L，ZnCl2 6.5～7.5g/L，Fe2(SO4)3·7H2O 20～25g/L，生物素0.1～0.3g/L，硫酸1～2ml/L。