[发明专利]抗HCV药物筛选方法

摘要

本发明提供了一种以干扰素和利巴韦林为阳性对照，利用2a型嵌合病毒J6/JFH1转染Huh 7.5.1细胞产生有感染性的病毒颗粒这一HCV细胞培养体系(HCVcell culture，HCVcc)进行体外抗HCV药物筛选的方法。该方法包括确定最适Huh7.5.1细胞浓度、最适感染复数以及最佳干扰素和利巴韦林给药方式；在此基础上分别计算药物对细胞毒性(IC50)和半数致死浓度(EC50)，通过计算两者比值得到该药物的治疗指数(TI)。该方法的建立可以准确、快速、便捷的在体外进行抗HCV药物的筛选，为我国天然药物，化学合成药物等提供了体外抗HCV药物筛选的良好技术平台。

主权项

抗HCV药物筛选方法，包括下述步骤：(1)细胞生长曲线制作，确定最适Huh 7.5.1细胞浓度；(2)确定最适感染复数MOI；(3)以IFNE及RBV为阳性对照，建立HCV药物筛选方法：(3-1)选择最佳干扰素IFN和利巴韦林RBV给药方式；(3-2)MTT法检测IFNE及RBV细胞毒性，通过细胞生长抑制率，以Graphpad Prism5计算IC50值；(3-3)HCV PCR荧光定量法检测RNA载量，通过IFN、RBV对HCV复制抑制率，以Graphpad Prism 5计算EC50值；(3-4)IFN、RBV抗HCV药效评价，以药物对细胞毒性IC50和半数致死浓度EC50，通过计算两者比值得到该药物的治疗指数TI。