[发明专利]绒山羊PDK1基因cDNA编码区核苷酸序列

摘要

本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码PDK1蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。本发明通过比对已知的小鼠、大鼠、人、牛和猪的PDK1基因cDNA的核苷酸序列，找到保守区，设计出了一对用于RT-PCR扩增绒山羊PDK1基因cDNA编码区片段的引物并用这对引物通过RT-PCR方法扩增出了特异性片段，测序后得到了绒山羊PDK1基因cDNA的编码区的698bp的核苷酸序列和与它的第2位～第697位核苷酸序列对应的氨基酸序列。获得的这698bp的核苷酸序列可进一步用于绒山羊PDK1基因全长cDNA的克隆及用于通过RT-PCR或杂交的方法检测PDK1基因的组织表达特异性，也可用于重组表达得到蛋白后制备检测PDK1的抗体。

主权项

本发明涉及一段从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码PDK1蛋白的cDNA，更具体地说涉及编码PDK1蛋白质的cDNA编码区核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。目前应用RT‑PCR方法克隆基因并获得相应的核苷酸序列是获得基因(cDNA)核苷酸序列的常用方法。本项发明设计了一对引物并应用这对引物通过RT‑PCR方法扩增出了绒山羊PDK1基因cDNA的编码区特异性片段，经过测序后得到这一片段的698bp的核苷酸序列，其特征是在还没有绒山羊PDK1基因核苷酸序列的情况下，通过比较已知的小鼠、大鼠、人、牛和猪的PDK1基因的核苷酸序列，找到保守区，设计PCR简并引物，进而通过RT‑PCR方法扩增出了绒山羊PDK1基因cDNA的编码区片段，测序后得到了698bp的核苷酸序列和与它的第2位～第697位核苷酸序列对应的氨基酸序列，这一绒山羊PDK1基因cDNA编码区片段的核苷酸序列和与它的第2位～第697位的核苷酸序列对应的氨基酸序列在国内外是首次获得。基于上述说明的本发明的技术特征，本发明的独立权利要求表述为：一种自绒山羊分离的多核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列，是下列序列之一：1)序列表中SEQ ID NO：1的cDNA序列；2)与序列表中SEQ ID NO：1的cDNA序列第2位～第697位核苷酸之间的696bp的核苷酸序列对应的标注为SEQ ID NO：2的氨基酸序列。