[发明专利]一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法

摘要

本发明提供一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，通过对样品进行提取、上柱、洗涤、洗脱，然后向样品和标准品加入蒽酮显色剂后进行显色并在分光光度计下测定其吸光度，通过计算得到样品的人参总皂苷含量。本发明的方法具有测定速度快、显色稳定、重复性好、准确度高、相对误差小等优点，可广泛用于各类参类产品的测定。

主权项

1、一种蒽酮比色法测定人参总皂苷的方法，其特征在于该方法的步骤如下：(1)玻璃层析柱制备该玻璃层析柱由15mm×120mm玻璃柱、柱底有砂芯隔板与控制流速的柱活塞组成，柱内装5-10g大孔吸附树脂，在大孔吸附树脂上覆盖1-3g中性氧化铝，在柱装好后，先用25ml 70％(V/V)乙醇水溶液洗柱，然后用25ml蒸馏水洗去保留在柱内的乙醇，使柱内大孔吸附树脂达到平衡；(2)样品纯化含有人参总皂苷的液体样品，用干滤纸过滤得到滤液，取所述滤液1-2ml置于大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水进行洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到纯化样品；(3)标准样品制备取人参皂苷Re和蒸馏水以10-200μg/ml比例置于100ml容量瓶中，混合、溶解并定溶至刻度，取1-2ml所得溶液置于所述大孔吸附树脂玻璃层析柱上，先用40-50ml蒸馏水洗涤，随后用25-30ml的20-30％(V/V)乙醇水溶液洗涤，再用25-30ml的70-80％(V/V)乙醇水溶液洗脱，洗脱液用蒸发皿收集，然后在沸水浴中蒸干，得到标准样品；(4)显色步骤将步骤(2)得到的纯化样品和步骤(3)得到的标准样品分别加入2ml蒸馏水；另取一个蒸发皿加入2ml蒸馏水作试剂空白；将0.1-0.3g蒽酮试剂溶于100ml 95-98％(重量)浓硫酸中得到蒽酮显色剂，分别向上述三个蒸发皿加入6ml所述的蒽酮显色剂，放在水浴上加热，此时溶液显蓝绿色；(5)吸光度测定步骤让步骤(4)得到的样品、标准样品和试剂空白溶液降至室温，用分光光度计或紫外可见光分光光度计在波长580-620nm处以空白校零，分别测定样品和标准品的吸光度；(6)人参总皂苷的计算步骤在步骤(5)测定得到的样品和标准样品的吸光度，按照下述公式计算样品中的人参总皂苷含量：式中：C-样品吸光度相当于标准品的含量，单位为μg；C＝标准品含量×样品的吸光度÷标准品的吸光度V₂-样品滤波总体积(ml)；V₁-样品上柱体积(ml)；m-样品质量(g)或样品体积(ml)。