[发明专利]利用萌发种子胚芽鞘转化外源基因的方法

摘要

一种利用萌发种子胚芽鞘转化外源基因的方法，属植物基因工程技术领域。其主要步骤包括：(1)种子常规发芽，当胚芽鞘生长到适宜长度时进行转化；(2)用微量注射器吸取已活化培养好的农杆菌菌液；(3)注射器针头垂直从胚芽鞘顶部穿透胚芽鞘刺入损伤胚芽生长点，并将菌液注入生长点和胚芽鞘腔内或用刀片在胚芽鞘基部胚芽生长点上方横切断胚芽鞘，刺伤生长点后将菌液滴人生长点和胚芽鞘池进行转化共培养；(4)当种子继续生长至幼苗时喷洒除草剂，因抗除草剂基因是转化的标记基因，故抗除草剂的幼苗为初选转基因植株；(5)初选植株种植田间，获得的种子进行基因鉴定。该方法具有简便、快速、高效、规模化转化等特点，可用于萌发种子具有胚芽鞘的禾本科植物。

主权项

一种利用种子胚芽鞘转化外源基因的方法，其特征为：①利用胚芽鞘长度作为胚芽生长发育的生理形态指标，操控基因转化的适宜时机，并以胚芽鞘腔或胚芽鞘池作为农杆菌转化共培养的内外环境，有利于提高基因转化率；②采用胚芽鞘微针注射或横切胚芽鞘的方法刺伤胚芽鞘细胞，并将农杆菌菌液注入生长点及胚芽鞘腔或胚芽鞘池中进行转化共培养；③采用以农杆菌为转化载体系统及萌发种子胚芽生长点的种质细胞为受体细胞，使两者的最大基因转化潜力有机结合，提高基因转化能力。