[发明专利]一种快速筛选降胆固醇乳酸菌的方法

摘要

一种快速筛选降胆固醇乳酸菌的方法，取经初步分离纯化的乳酸菌，挑取单个菌落到0.2mL PCR管中，加10μL无菌1×TE缓冲液混匀，100℃煮沸5min，-20℃冷冻5min，循环2～3次，5000r/min离心1min，吸取8μL上清液作PCR扩增的DNA模板；进行PCR扩增，电泳实验分析确认BSH基因的阴阳性。进一步确定具有胆固醇降解能力的菌株，12小时即可确定乳酸菌胆盐水解酶的阴阳性。本发明具有工作周期短、工作量小的突出优点。

主权项

1、一种快速筛选降胆固醇乳酸菌的方法，包括如下步骤：(1)菌株PCR扩增取经初步分离纯化的乳酸菌，挑取单个菌落到0.2mL PCR管中，加入10μL无菌1×TE缓冲液混匀，100℃煮沸5min，-20℃冷冻5min，循环2～3次，5000r/min离心1min，吸取8μL上清液作为PCR扩增的DNA模板；然后按照下列反应条件进行PCR扩增：第一次变性反应                94℃       5min35个循环反应       变性       94℃       1min                   退火       56～58℃   1min                   聚合       72℃       1～2min末循环                        72℃       1～2minPCR体系成分表如下：PCR体系成分表中所述的一对上下游引物1、2为：引物1BSHPf：5’-GGTTA CGATT ACGCC TAGAA AATAT CC-3’引物2BSHPr  5’-TTAAT TCAGT CGTAT CCAAG TGCTC ATG-3’(2)电泳实验分析具有胆盐水解酶(BSH)基因的乳酸菌可扩增出大小为950bp的一条特异条带，根据电泳图谱分析，即可确定待检乳酸菌是否有胆盐水解酶(BSH)。