[发明专利]人α-防御素抗病毒活性突变体的筛选方法无效
| 申请号： | 200910191848.6 | 申请日： | 2009-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN101724633A | 公开（公告）日： | 2010-06-09 |
| 发明（设计）人： | 王军平;王艾平;陈芳;陈默;许杨;粟永萍;程天民 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N33/53 |
| 代理公司： | 重庆志合专利事务所 50210 | 代理人： | 胡荣珲 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人α-防御素抗病毒活性突变体的筛选方法，有以下步骤：人α-防御素的定点随机突变、突变体库构建、突变体在CHO细胞中的定点整合与均一性表达，以及高效抗病毒活性突变体的筛选。本发明方法通过突变与筛选使人α-防御素分子，在保留其基本生物学特性的基础上抗病毒能力显著提高，为寻找和研制高效、低毒抗病毒药物开辟一条新途径。 | ||
| 搜索关键词： | 防御 抗病毒 活性 突变体 筛选 方法 | ||
【主权项】：
一种人α-防御素抗病毒活性突变体的筛选方法，其特征在于有以下步骤：1)人α-防御素突变体cDNA文库的构建：A.选择人α-防御素分子中具有适应性进化潜能的氨基酸位点作为突变位点；B.通过DNA合成和PCR扩增获得编码人α-防御素突变体的cDNA片段；C.构建含有人α-防御素突变体cDNA片段的质粒文库；2)人α-防御素突变体在CHO细胞中的定点整合与均一性表达：A.特定CHO细胞的培养：复苏并传代培养染色体上带有FRT位点的Flp-In-CHO细胞；B.编码人α-防御素突变体的cDNA在CHO细胞中的定点整合；C.表达人α-防御素突变体的阳性细胞的筛选及单克隆化；3)抗病毒活性筛选；4)抗病毒活性显著增强的人α-防御素突变体的生物学特性鉴定。
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