[发明专利]一种快速检测鉴定茄科青枯菌侵染引起的青枯病的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测鉴定茄科青枯菌侵染引起的青枯病的方法。该方法由植物病样制备、肉眼观察和PCR验证三个阶段组成，可在4小时内完成检测与鉴定，而且检测鉴定成本低。该方法突破了传统的植物细菌病害鉴定周期长、专业性强和成本较高等局限性，也克服了从国外进口的微生物鉴定系统需要专用仪器设备和耗材、成本高和鉴定周期较长的不足，将病样品的特殊表症与分子生物技术有机地结合起来，结果准确可靠，从而达到实际生产中对植物病害鉴定快速、准确的要求。

主权项

1、一种快速检测鉴定茄科青枯菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的青枯病的方法，包括以下操作步骤：(1)检测病样品的准备：用水冲洗干净待检病样品的茎基部和根部，从茎基部取一小块大小为1.5～2mm×2.5～3mm的维管束组织；(2)肉眼观察病样组织在载玻片水滴中表型：吸取80～100μL的灭菌水，滴在干净的载玻片上，将步骤(1)中维管束组织放入载玻片的水滴中，并压入水滴中，静置，观察有无雾状菌浓从病样组织中喷出；如有，继续下一步试验，如无，说明该病样品不是由茄科青枯菌侵染引起的；(3)PCR进一步检测验证：取步骤(2)的水滴里病样组织喷出的雾状菌浓作为模板，进行PCR反应；所述上游引物为5′-atgattctgcggcctacgcggcat-3′，所述下游引物为5′-agtcgggtctggcgtcgaccatcaa-3′；(4)结果鉴别：将步骤(3)所得的反应产物在琼脂糖凝胶上电泳；在凝胶成像系统中观察，如有517bp大小的特异性条带，即确认病样品是由茄科青枯菌侵染引起的，如无该特异条带，则该病样品不是茄科青枯菌侵染引起的。