[发明专利]携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体。本发明通过纳米技术制备超顺磁纳米铁微粒，功能化修饰其表面，将视网膜色素上皮细胞衍生因子构建在含绿色荧光蛋白报告基因的腺病毒相关表达载体AAV-GFP上，进而将USPIO与AAV-GFP交联，体外诱导胶质瘤细胞将其吞噬。本发明利用所述载体其磁性标记作用，活体无创监测PEDF对脑胶质瘤生长、分化、侵袭性的影响，为胶质瘤基因治疗的临床应用开辟新的导入及监测途径，为临床抗肿瘤治疗的研究提供创新性的操作手段和积累探索性的试验经验。

主权项

携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是通过纳米技术制备超顺磁纳米铁微粒，功能化修饰其表面，将视网膜色素上皮细胞衍生因子构建在含绿色荧光蛋白报告基因的腺病毒相关表达载体上，进而交联，制得所述载体，其通过下述步骤制备：1)制备表面功能化超顺磁纳米铁微粒利用化学共沉淀法合成纳米Fe3O4磁性离子，表面葡聚糖包被后，进行羧基化功能基团修饰，并利用透射电镜显示纳米磁性微粒；2)合成人AAV‑PEDF与USPIO交联制成基因载体(1)制备PEDF‑USPIO载体：按常规方法PCR扩增PEDF cDNA，将PCR扩增出的PEDF cDNA用BamHI和NcoI双酶切后，连入真核表达载体中，构建成AAV‑PEDF表达载体；(2)PEDF‑USPIO载体的核磁成像：制得的PEDF‑USPIO加入胶质瘤细胞培养基中，与细胞孵育，确定细胞内铁浓度与PEDF‑USPIO的浓度以及孵育时间的关系。