[发明专利]利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法无效
| 申请号： | 200910195924.0 | 申请日： | 2009-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN102021141A | 公开（公告）日： | 2011-04-20 |
| 发明（设计）人： | 祝加学;沈尊理;秦金保;沈华;张兆峰 | 申请（专利权）人： | 上海市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 20008*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。首先，在无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎、清洗，离心弃上清；然后用酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液消化神经碎块30～60分钟，反复吹打，然后离心、弃上清，得到细胞团块；最后用许旺细胞培养液重悬，即可。本发明使用复合胶原酶和酵素酶分离纯化许旺细胞，经过第一次纯化后，许旺细胞的纯度就可达到98％。再次纯化扩增后，许旺细胞的纯度就可以接近100％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 胶原酶 酵素 分离 纯化 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法，其特征在于，其包括下述步骤：(1)无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎神经段并置于DMEM培养基中清洗，离心弃上清；(2)用3～5倍组织量的质量体积比为0.05～0.3％的消化酶溶液消化神经碎块30～60分钟；所述的消化酶是酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液；(3)将步骤(2)得到的混悬液用吸管反复吹打3～5分钟；(4)以600g离心5～10分钟，弃上清，得到细胞团块；(5)用许旺细胞培养液重悬步骤(4)得到的细胞，即可。
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