[发明专利]一种基因修饰及调控的内皮祖细胞捕获支架的制备方法

摘要

本发明提供了一种基因修饰及调控的内皮祖细胞捕获支架的制备方法，其特征在于，具体步骤为：第一步：裸支架的预处理；第二步：内皮祖细胞抗体支架的制备；第三步：将Caspase基因与平滑肌细胞分化的特异启动子基因片段通过基因重组方式结合后，再与真核表达载体pEGFPC2或pcDNA3.1通过基因重组方式结合得到融合基因；第四步：将第三步所得融合基因溶于去离子水溶液得到融合基因浓度为10-100mg/ml的溶液，将第二步得到的内皮祖细胞抗体支架置于该溶液中，4℃共孵育120分钟后取出，在超净台中自然风干2-6小时后，4℃保存。本发明的优点是具有抗再狭窄和保护内皮修复的双重功能。

主权项

一种基因修饰及调控的内皮祖细胞捕获支架的制备方法，其特征在于，具体步骤为：第一步：将血管内支架在1wt％氨基硅烷偶联剂乙醇溶液中以频率53kHz超声处理2小时，依次用0.1wt％稀盐酸和蒸馏水冲洗后烘干；将316L不锈钢支架、镁合金支架或钴镍金属支架置于0.1wt％壳聚糖的0.2wt％盐酸水溶液中浸泡5分钟后取出，用蒸馏水反复冲洗；再置于0.1wt％肝素水溶液中浸泡5分钟后取出，用去离子水冲洗，重复3-10次，在60℃烘干；第二步：在4℃冰箱内将第一步处理后的血管内支架浸入50-100ug/ml CD34或CD133抗体溶液中12小时后，用蒸馏水浸泡洗涤1min，重复洗涤3次，自然晾干后，得到内皮祖细胞抗体支架，于4℃冰箱保存待用；第三步：通过提取人类基因组后进行PCR扩增得到含有5’端AseI酶切位点和3’端NheI酶切位点的平滑肌细胞分化的特异启动子基因片段；通过酶切及酶接反应将pEGFPC2或pcDNA3.1中的原有启动子CMV切除，并在原位酶接上述平滑肌细胞分化的特异启动子基因片段的5’端；通过提取人类基因组后进行PCR扩增得到含有5’端NheI酶切位点的Caspase基因，通过酶切及酶接反应将上述平滑肌细胞分化的特异启动子基因片段的3’端与Caspase基因结合得到融合基因；第四步：将第三步所得融合基因与腺病毒载体Ad结合后与阳离子脂质体以体积比1∶1混合、4℃孵育30分钟后，溶于去离子水溶液得到融合基因浓度为10-100mg/ml的溶液，将第二步得到的内皮祖细胞抗体支架置于该溶液中，4℃共孵育120分钟后取出，在超净台中自然风干2-6小时后，4℃保存。