[发明专利]一种电化学传感器对微量赭曲霉毒素A进行检测的方法

摘要

一种电化学传感器对微量赭曲霉毒素A进行检测的方法，属于电化学传感器技术领域。本发明对波碳电极进行修饰，做成适配体电化学传感器，对赭曲霉毒素A标准品进行检测，建立标准曲线，以达到对含赭曲霉毒素A样品进行定量检测的目的；本发明旨在发明一种基于适配体的电化学传感器，在波碳电极表面修饰上单链DNA，并通过碱基配对将适体、金纳米粒子修饰的单链DNA修饰到电极表面，进而建立赭曲霉毒素A定量检测的标准曲线。本发明旨在建立灵敏度高、可操作性强的赭曲霉毒素A定量检测方法。

主权项

一种电化学传感器对微量赭曲霉毒素A进行检测的方法，其特征在于：对波碳电极进行修饰，做成适配体电化学传感器，对赭曲霉毒素A标准品进行检测，建立标准曲线，以达到对含赭曲霉毒素A样品进行定量检测的目的；步骤为(1)波碳电极的抛光处理：将波碳电极依次用1μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝粉末进行打磨处理；然后置于1∶1乙醇水溶液中超声5min；(2)金纳米粒子修饰的DNA的制备：将1mL浓度为2×10-9mol/L的金纳米粒子溶液以10000r/min离心15min，去掉上清液，将金纳米粒子再重新分散于50μL双蒸水中，将重分散后的金纳米粒子以10μL/管分装3管，于3管金纳米粒子溶液中分别加入10μL、20μL、30μL巯基修饰的单链DNA，混合均匀，室温反应12h后，加入1μL 2mol/L的NaCl溶液，混合均匀，继续室温反应12h；然后将反应好的溶液跑电泳确定反应效果，没有反应上的金纳米粒子遇到电泳液中的盐会在胶孔中聚沉，呈蓝色，而与DNA反应的金纳米粒子不会聚沉；(3)波碳电极的修饰：将抛光处理好的波碳电极作为工作电极在浓度为20mmol/L的对氨基苯磺酸溶液中，在0.01v/s下进行循环伏安扫描，对氨基苯磺酸基被修饰到电极表面；将扫描后的电极置于40m mol/L PCl5溶液中30min，进行活化；(4)适配体电化学传感器的制备：将氨基修饰的单链DNA 6μL滴加于已完成活化的电极表面，待反应2h后，将电极放于清水中清洗5min，再将其置于5μmol/L适配体溶液中反应12h，清洗电极，最后置于金纳米粒子修饰的DNA中反应12h，即制得电化学传感器；(5)对赭曲霉毒素A标准品进行检测，建立标准曲线：将修饰好的电化学传感器置于赭曲霉毒素A标准品溶液中反应，标准品溶液浓度依次为0ng/mL、0.1ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL，每个浓度分别反应15min后，将电化学传感器置于8×10-5mol/L亚甲基蓝溶液中反应10min，反应完成后，将电化学传感器作为工作电极，在0.1mol/L Tris-HCl中扫描循环伏安图谱；扫描完成后用超纯水洗涤1min，再进行下一个浓度的反应，进行扫描高电位为0.4v，低电位为0v，扫描速度为0.1v/s；根据扫描循环伏安图谱的氧化峰的电流值与对应的赭曲霉毒素A标准品浓度建立标准曲线；(6)对含赭曲霉毒素A样品进行定量检测：将修饰好的电化学传感器置于含赭曲霉毒素A的待测样品中反应，反应15min后，将电化学传感器置于8×10-5mol/L亚甲基蓝溶液中反应10min，反应完成后，将电化学传感器作为工作电极，在0.1mol/L Tris-HCl中扫描循环伏安图谱；扫描完成后用超纯水洗涤1min，进行扫描高电位为0.4v，低电位为0v，扫描速度为0.1v/s；根据扫描循环伏安图谱的氧化峰的电流值从标准曲线中求得对应的赭曲霉毒素A的浓度。