[发明专利]高通量可目视化人乳头瘤病毒基因芯片快速分型检测方法有效
申请号: | 200910219537.6 | 申请日: | 2009-12-17 |
公开(公告)号: | CN101792819A | 公开(公告)日: | 2010-08-04 |
发明(设计)人: | 李铮;王小强;郭森;陈超;党倩丽;党二乐 | 申请(专利权)人: | 陕西北美基因股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68 |
代理公司: | 西安智邦专利商标代理有限公司 61211 | 代理人: | 徐平 |
地址: | 710069 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明涉及一种高通量可目视化对人乳头瘤病毒(HPV)进行快速分型检测的方法,该方法中使用胶体金标记核酸探针,通过银染来提高金信号,可通过目视直接进行信号判断,无需昂贵的信号检测设备。操作简便,省时,灵敏度高,检测结果稳定,准确性好。解决了目前检测结果不能通过肉眼直接看到,需要通过相应的仪器检测的缺点。该HPV分型检测的基因芯片集成系统,能够对感染HPV病毒亚型进行快速排查,检测对象将涵盖我国常见高发且危害严重的多种HPV亚型。通过对芯片的设计,达到一次试验可检测多个病人的高通量临检要求。该方法可广泛用于临床诊断和女性体检,还可用于宫颈癌、湿疣等疾病的早期筛查,对于HPV的临床诊断和宫颈癌的早期预防有重要的意义。 | ||
搜索关键词: | 通量 目视 乳头 病毒 基因芯片 快速 检测 方法 | ||
【主权项】:
高通量可目视化人乳头瘤病毒基因芯片快速分型检测方法,其特征在于:该方法的实现步骤包括:(1)制备芯片(1.1)设计检测探针根据人乳头瘤病毒的13种亚型设计检测探针,从左至右为5’-3’,探针序列如下:HPV 6 5’-ATCCGTAACTACATCTTCCACATACACCAA-3’HPV 11 5’-ATCTGTGTCTAAATCTGCTACATACACTAA-3’HPV 16 5’-GTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3’HPV 18 5’-TGCTTCTACACAGTCTCCTGTACCTGGGCA-3’HPV 31 5’-TGTTTGTGCTGCAATTGCAAACAGTGATAC-3’HPV 33 5’-TTTATGCACACAAGTAACTAGTGACAGTAC-3’HPV 35 5’-GTCTGTGTGTTCTGCTGTGTCTTCTAGTGA-3’HPV 45 5’-ACACAAAATCCTGTGCCAAGTACAT-3’HPV 51 5’-AGCACTGCCACTGCTGCGGTTTCCCCAACA-3’HPV 52 5’-TGCTGAGGTTAAAAAGGAAAGCACATATAA-3’HPV 53 5’-TCTATGTCTACATATAATTCAAAGCAAAT-3’HPV 56 5’-GTACTGCTACAGAACAGTTAAGTAAATATG-3’HPV 58 5’-ATTATGCACTGAAGTAACTAAGGAAGGTAC-3’检测探针的5’端均采用NH2-C6修饰;(1.2)芯片点制先进行片基表面醛基化修饰处理,然后将检测探针按照设计好的阵列固定在片基上,再进行芯片点样后处理,得寡核苷酸芯片;(2)待检测样本的处理(2.1)引物的选用选用人乳头瘤病毒病原对应的引物,即通用引物GP5和GP6,序列如下:GP5---5’-TTT GTT ACT GTG GTA GAT ACT AC-3’GP6---5’-GAA AAA TAA ACT GTA AAT CAT ATT C-3’(2.2)制备不对称PCR扩增产物用引物对待检样本进行不对称PCR,生成不对称PCR扩增产物,该产物是与固定在芯片上的检测探针特异性互补的单链DNA产物;(3)胶体金标记经修饰的捕获探针(3.1)设计合成捕获探针以通用引物GP6的互补链作为捕获探针,该探针的序列如下:5′-GAA TAT GAT TTA CAG TTT ATT TTT CTT TTT TTT TT-3′在该捕获探针的3′端做SH-C6修饰;(3.2)用胶体金标记经SH-C6修饰的捕获探针;(4)芯片杂交取不对称PCR扩增产物和经胶体金标记的捕获探针置于芯片表面,放置杂交盒内进行杂交反应,反应完毕后清洗芯片;(5)银染显色取银显影液均匀涂布在芯片杂交区域上,避光反应后,去除多余的显影液,室温离心甩干后肉眼观察,或用平面扫描仪对玻片进行信号扫描,利用软件进行数据分析。
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