[发明专利]5′-酰化尿苷的制备方法及在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用

摘要

本发明公开一种5′-酰化尿苷的制备方法及在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用，具体制备方法是将核糖核酸(RNA)粉溶解、酶解，并将酶解液进行超滤纯化并进行阴离子树脂柱交换分离、纳滤、离心得到5′-尿苷；将5′-尿苷悬浮于吡啶与N,N二甲基甲酰胺的混合溶液中并逐渐加入等当量的酸酐，蒸发溶剂；用90％甲醇溶解残留物，吸附至硅胶粒中，再蒸发掉多余溶剂；从再将剩余混合样液上的内有氯仿液的硅胶浆柱内，用氯仿-甲醇∶氯仿(20∶80)的洗脱液进行梯度线性洗脱，用薄板层析确定阶段洗脱液，收集所确定的阶段洗脱液，既得到所要的5′-酰化尿苷溶液，可重结晶或真空干燥，得到5′-酰化尿苷。

主权项

一种5’-酰化尿苷的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：a.将核糖核酸RNA粉置于60℃水中溶解并控制PH值5.0～5.5，完全溶解后，升温至90～95℃，保持1小时后冷却降温至70℃；b.加入RP1酶，保持温度至68～70℃酶解12小时，升温至90～95℃使酶失活；c.酶解液冷却降温至30℃～35℃，将酶解液进行超滤纯化，得到超滤液；d.将超滤液进行阴离子树脂柱交换分离，先用纯水透洗树脂柱，直至流出液紫外吸收值OD260×稀释倍数＜20时，结束水洗；再用0.8M甲酸溶液清洗，当流出液紫外吸收值OD254×稀释倍数≥30且OD250/OD260大于0.72小于0.78时，开始收集流出液，直至流出液紫外吸收值OD279×稀释倍数＜20，结束收集；e.将收集液调pH值5.0～6.0，通过纳滤浓缩至浓度120g/L，用NaOH溶液调PH值6.8～7.0，加2倍乙醇静置2小时后，离心得到5’-尿苷；f.将5’-尿苷悬浮于吡啶与N.N二甲基甲酰胺按体积比为1∶1比例的溶液中，冰浴降温至0℃；g.向混合液中逐渐加入等当量的酸酐，于0℃搅拌12～24小时，然后加入纯水，5℃真空蒸发溶剂；h.用90％甲醇溶解残留物，吸附至硅胶粒中，蒸发多余溶剂；i.再将剩余混合样液上内有氯仿液硅胶浆柱内，用氯仿-甲醇∶氯仿(20∶80)的洗脱液进行梯度线性洗脱，用薄板层析确定阶段洗脱液，收集所确定的阶段洗脱液。