[发明专利]一种工程蝇凝集素的高效纯化方法

摘要

本发明涉及一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其纯化的步骤是：对工程蝇的幼虫进行必要的诱导，待幼虫化蛹后(80％化蛹)，收集蛹，除去饲养中混入的杂质，以生理盐水或者BIS做为提取溶剂提取蛹糖蛋白，提取液经离心、超滤、浓缩，吸附色谱柱脱色纯化、离子交换色谱柱纯化、凝胶色谱柱纯化、浓缩等步骤得到一类分子量在68-22kDa之间的糖蛋白。本发明以工程蝇为原料，工程蝇凝集素有糖结合专一性，其能与色谱柱上的特定配基结合，适合采用特异性纯化，利用色谱分离技术对其进行提取、分离、纯化，并且工程蝇凝集素在40℃下稳定，适合室温提取，提取方法不仅简单而且实用，适合大规模工业生产。

主权项

一种工程蝇凝集素的高效纯化方法，其特征在于：其纯化的步骤是：(1)对工程蝇的幼虫进行诱导，待幼虫化蛹后，收集蛹，除去饲养过程中混入的杂质，清水漂洗，收集漂洗干净的蛹，加提取溶剂研磨，3-5℃静置0.8-1.2h，得到浸提液备用；(2)由步骤(1)得到的浸提液，离心，过滤除去杂质，重复离心、过滤2-4次，收集过滤后的上清液；(3)将步骤(2)得到的浓缩液混胶，在4-40℃条件下与胶混合，每30min缓慢搅拌一次，3.5-4.5h后装柱，缓冲液平衡，缓冲液洗脱流速控制在0.8-1.2mL/min，洗脱杂蛋白，之后进行糖溶液竞争性洗脱，竞争性洗脱液流速控制在0.5mL/min，收集洗脱峰；(4)将收集到洗脱峰过Sephadex G200凝胶柱，先后检测到四个峰值，分别对各个峰的成分进行回收、冷冻、干燥，得到白色粉末即为凝集素。