[发明专利]一种提高液体氨肽酶稳定性的方法及该酶的应用

摘要

一种提高液体氨肽酶稳定性的方法及该酶的应用，属于酶制剂、食品添加剂技术领域。本发明涉及枯草芽孢杆菌Zj016液体氨肽酶的提取工艺，提高液体氨肽酶稳定性，氨肽酶在大豆分离蛋白深度水解的应用。枯草芽孢杆菌Zj016液体发酵液经过离心、澄清、浓缩、脱盐和乙醇沉淀、复溶操作得液体氨肽酶，通过控制pH条件和/或添加稳定剂可使液体氨肽酶保持稳定，氨肽酶可对大豆分离蛋白底物进行深度水解，产生较高含量的小肽和氨基酸，并有与许多内切酶组合应用的潜力，因而在蛋白原料的食品加工中具广泛的应用前景。

主权项

一种提高液体氨肽酶稳定性的方法，其特征是枯草芽孢杆菌Zj016的发酵液经离心、澄清、超滤浓缩、脱盐、醇沉、复溶、控制pH和/或添加稳定剂或辅因子提高稳定性，得食品级液体氨肽酶，工艺为：A枯草芽孢杆菌Zj016发酵液中氨肽酶的提取：(1)发酵液经10000rpm，4℃离心10min后，取上清，弃沉淀；(2)向收集的上清液中加入(NH4)2SO4，边加边搅拌，至(NH4)2SO4质量分数达16％-20％，以10000rpm，4℃离心10min后，弃沉淀，收集澄清液；(3)将收集到的澄清液进行超滤浓缩，浓缩2.5-3倍，所选用超滤膜截留分子量为50kDa；室温，操作压0.1Mpa，pH自然，流速30～35mL/min；弃透过液；(4)将得到的超滤浓缩液进行超滤脱盐，所选用超滤膜截留分子量为30kDa，室温，操作压0.1Mpa，流速40～45mL/min；弃透过液；(5)将脱盐后的液体，加乙醇进行沉析，乙醇预冷，醇沉在冰浴中进行，醇沉时pH 9，至乙醇终浓度达68％-70％时得氨肽酶沉淀，静止10min后，8000rpm，4℃离心10min，弃上清，取沉淀；(6)醇沉后把沉淀用pH9、0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液溶解成酶液，控制酶液为6000U/mL，4℃低温保藏；B提高液体氨肽酶的稳定性：(1)控制酶液pH为5时稳定性最好，4℃一个月后相对酶活为80％；(2)添加苯甲酸钠作为稳定剂，控制酶液中苯甲酸钠质量浓度为0.1％时，-20℃保藏，一个月后相对酶活为80％；(3)添加0.2μmol/L Co2+辅因子，4℃一个月后，相对酶活保存率90％；采取以上措施之一项，或(1)和(2)两项，或(1)和(3)两项。