[发明专利]新生儿溶血病检测试剂盒的制备方法

摘要

本发明涉及一种新生儿溶血病检测试剂盒的制备方法，由四张微柱凝胶卡组成，分别为具有6个微柱凝胶管的HDN产前预测卡I、HDN产前预测卡II、HDN产后检测卡I及HDN产后检测卡II。所述方法包括以下工艺过程：凝胶悬浮介质的配制、凝胶的制备、抗体的选择、凝胶的悬浮和分装。所述凝胶悬浮介质配方如下：对羟基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml，对羟基苯甲酸丙酯1.0-1.5)×10-4g/ml，甘氨酸(1.6-1.9)×10-2g/ml，氯化钠(1.7-1.8)×10-3g/ml，磷酸二氢钾(2.1-2.4)×10-4g/ml，磷酸氢二钠(4.6-4.8)×10-4g/ml，牛血清白蛋白≤2％，以上试剂用蒸馏水溶解，调pH值为6.6-6.8。采用本发明方法制备的新生儿溶血病检测试剂盒，灵敏度高，特异性好且质量稳定。专用于新生儿溶血病检测。

主权项

一种新生儿溶血病检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述试剂盒由四张微柱凝胶卡组成，分别为一张HDN产前预测卡I、一张HDN产前预测卡II、一张HDN产后检测卡I及一张HDN产后检测卡II，所述HDN产前预测卡I具有6个微柱凝胶管，分别是二管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、二管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管和二管含有IgM性质的单克隆抗D抗体的凝胶管；所述HDN产前预测卡II具有6个微柱凝胶管，皆为含有IgG抗体的凝胶管；所述HDN产后检测卡I具有6个微柱凝胶管，分别为二管含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶管、二管含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶管、一管含有IgM性质的单克隆抗D抗体的凝胶管和一管含有凝胶悬浮介质的凝胶管；所述HDN产后检测卡II具有6个微柱凝胶管，皆为含有IgG抗体的凝胶管，所述方法包括以下工艺过程：步骤一、凝胶悬浮介质的配制所述凝胶悬浮介质配方如下：对羟基苯甲酸甲酯(5.5-6.5)×10-4g/ml对羟基苯甲酸丙酯(1.0-1.5)×10-4g/ml甘氨酸 (1.6-1.9)×10-2g/ml氯化钠 (1.7-1.8)×10-3g/ml磷酸二氢钾 (2.1-2.4)×10-4g/ml磷酸氢二钠 (4.6-4.8)×10-4g/ml牛血清白蛋白 ≤2％，以上试剂用蒸馏水溶解，调pH值为6.6-6.8，步骤二、凝胶的制备选用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶，颗粒大小为30-60纳米。用步骤一配制的凝胶悬浮介质浸泡后再用该凝胶悬浮介质洗涤3-5次，除去凝胶破损碎片以及聚集的凝胶颗粒，收集得到颗粒大小均匀的、且完整呈球形的凝胶，步骤三、抗体的选择选择IgM性质的单克隆抗A抗体，效价≥128选择IgM性质的单克隆抗B抗体，效价≥128选择IgM性质的单克隆抗D抗体，效价≥64选择IgG性质的抗人球蛋白试剂，要求按照体积比1∶2和体积比1∶4稀释的IgG抗人球蛋白血清对照体积比1∶16稀释的抗D IgG致敏的红细胞有肉眼可见，与IgG性质抗D致敏红细胞产生阳性反应，与无IgG致敏的红细胞反应为阴性，步骤四、凝胶的配制将步骤二制备的凝胶与步骤三选择的各抗体均按照体积比2∶1～6∶1的比例混合，分别配制成含有IgM性质的单克隆抗A抗体的凝胶、含有IgM性质的单克隆抗B抗体的凝胶、含有IgM性质的单克隆抗D抗体的凝胶和含有IgG性质的抗人球蛋白凝胶；将步骤二制备的凝胶与步骤一配制的凝胶悬浮介质按照体积比2∶1～6∶1的比例混合，配制成含有凝胶悬浮介质的凝胶，步骤五、分装按照每管22-28微升的量，将步骤四配制的各凝胶分别按不同的用途加入到四张空白卡片的微柱管中，分别形成具有6个微柱凝胶管的HDN产前预测卡I、具有6个微柱凝胶管的HDN产前预测卡II、具有6个微柱凝胶管的HDN产后检测卡I和具有6个微柱凝胶管的HDN产后检测卡II，从而组成了一套新生儿溶血病检测试剂盒。