[发明专利]一种微生物体内合成生物柴油的方法

摘要

一种微生物内合成生物柴油的方法，在大肠杆菌中实现，其步骤为：分别将不动杆菌蜡脂合成酶基因atfA、大肠杆菌脂酰辅酶A合成酶基因fadD、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因pdc和乙醇脱氢酶基因adhB四个基因串联克隆到pET表达载体上得到质粒pXT11；将pXT11转入到含有质粒pMSD8和pMSD15的大肠杆菌得到大肠杆菌菌株XT31；大肠杆菌XT31生产生物柴油。本发明实现了由糖到生物柴油的微生物转化，为木质纤维素生物质制备生物柴油奠定了基础，从根本上解决生物柴油制备中原料供应不足的问题；该技术也不需要经过甲醇酯化的步骤，所以大大降低了成本，也没有甘油副产物形成等问题。

主权项

一种微生物体内合成生物柴油的方法，主要步骤为：A)分别将不动杆菌蜡脂合成酶基因atfA、大肠杆菌脂酰辅酶A合成酶基因fadD、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因pdc和乙醇脱氢酶基因adhB四个基因克隆到表达载体pET28b上，基因的两端分别带上NdeI和SpeI酶切位点，使上述四个基因都置于T7启动子下游，由T7启动子驱动表达；B)通过SpeI和XbaI是同尾酶这一特点，将fadD基因插入到atfA基因片段后的SpeI位点得到质粒pXT9，将adhB基因插入到pdc基因片段后的SpeI位点得到质粒pXT10；再将pdc+adhB基因片度插入到atfA+fadD基因片段后的SpeI位点得到四个基因共表达的质粒pXT11；C)将pXT11转入到含有质粒pMSD8和pMSD15的大肠杆菌菌株得到大肠杆菌菌株XT31；D)大肠杆菌菌株XT31经过IPTG和阿拉伯糖诱导产生生物柴油。