[发明专利]一种单分散性磁性人铁蛋白的制备方法

摘要

一种单分散性磁性人铁蛋白的制备方法，包括直接以重组人铁蛋白为模板，通过一步仿生合成的方法，在重组人铁蛋白的内部形成磁性纳米颗粒，然后经过分离纯化所得到的单分散性的和无磁相互作用的磁性人铁蛋白。按照本发明的方法制备的磁性人铁蛋白具有完整的重组人铁蛋白壳和磁性纳米颗粒核，核的成分为Fe3O4或者γ-Fe2O3，通常具有尺寸均一、形状相似、分散性好的特点。核的平均直径可控制在1纳米到10纳米之间，取决于在合成过程中所加的铁原子数。通过该法制备的磁性人铁蛋白是单分散的和无磁相互作用的，因而解决了纳米磁性颗粒常存在的聚集问题，能够长期地稳定存在，在生物医学、电子和环境领域具有广阔的应用前景和市场前景。

主权项

一种单分散性磁性人铁蛋白的制备方法，以重组人铁蛋白为模板，通过仿生合成，在重组人铁蛋白的内部形成磁性纳米颗粒，经过分离纯化得到单分散性磁性人铁蛋白，主要步骤如下：1)以重组人铁蛋白为模板，将人铁蛋白的H亚基和L亚基的全长cDNA分别克隆和构建到质粒上；2)将含有人铁蛋白H亚基和L亚基的重组质粒分别转化或者共转化细菌Rosetta(DE3)pLysS，加入异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷激活T7启动子，诱导表达；3)表达结束后进行超声破碎释放蛋白；4)对蛋白进行分离和纯化；5)将亚铁盐和氧化剂加入重组人铁蛋白的溶液中进行反应，控制pH值为7～11，控制温度为25～80℃，在重组人铁蛋白内部形成强磁性的纳米颗粒；亚铁盐的浓度为每次加入的亚铁原子数与蛋白分子数之比在10～200之间，最终每个蛋白分子加入的铁原子数可在100～5000之间；氧化剂的浓度为每次加入H2O2的分子数与加入亚铁离子的原子数之比为2∶1或3∶1；蛋白浓度＞0.25mg/ml；6)排阻层析进行分离，离心和分子筛纯化后得到单分散磁性人铁蛋白颗粒。