[发明专利]一种建立高效表达人环氧合酶2的重组人肠癌细胞株的方法及应用无效
申请号: | 200910247524.X | 申请日: | 2009-12-30 |
公开(公告)号: | CN102115762A | 公开(公告)日: | 2011-07-06 |
发明(设计)人: | 李琦;范忠泽;周利红;王炎;刘宣 | 申请(专利权)人: | 上海中医药大学附属普陀医院 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02 |
代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 吴桂琴 |
地址: | 20006*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明属基因工程制药技术及应用领域,涉及一种建立高效表达人环氧合酶2的重组人肠癌细胞株HCT-116COX-2的方法及应用。本发明方法通过建立稳定转染含人环氧合酶2基因启动子编码序列和荧光素酶报告基因序列的永生化哺乳动物细胞系,经压力筛选和基因扩增后,获得稳定、灵敏、高效表达人环氧合酶2的肿瘤克隆细胞株,并将该细胞株应用于以人环氧合酶2基因为靶点的抗肿瘤药物的筛选及评价。本发明建立的重组人肠癌细胞株具有靶向性强、高效快速、反应灵敏等优点,具有可观的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 一种 建立 高效 表达 人环氧合酶 重组 肠癌 细胞株 方法 应用 | ||
【主权项】:
一种建立高效表达人环氧合酶2的重组人肠癌细胞株的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)构建稳定表达人环氧合酶2基因和荧光素酶报告基因的重组质粒pGL4‑COX‑2,通过提取人环氧合酶2基因启动子,以含荧光素酶报告基因的pGL4系列质粒为载体,插入人环氧合酶2基因启动子,构建含人环氧合酶2基因启动子和荧光素酶报告基因的pGL4‑COX‑2重组质粒;2)建立高效表达人环氧合酶2的重组人肠癌细胞株HCT‑116COX‑2稳定转染含人环氧合酶2基因启动子和荧光素酶报告基因的pGL4‑COX‑2重组质粒到人肠癌HCT‑116细胞株,通过药物加压筛选、基因扩增后,获得高效表达人环氧合酶2基因的克隆细胞株HCT‑116COX‑2;所述的细胞株同时高效表达人环氧合酶2和荧光素酶活性。
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