[发明专利]一种用亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方法

摘要

本发明涉及免疫分析领域，具体涉及一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方法。该方法以亲和素/链亲和素磁性复合微粒为载体，包被生物素化的抗体或抗原，然后加入待检标本和酶标抗体/酶标抗原/酶标抗抗体，最后加入显色底物，进行检测。生物素与亲和素/链亲和素有着很强的结合能力，可通过标记在磁性复合微粒表面的亲和素/链亲和素将生物素标记的抗原/抗体进行固定化，进而利用该系统对特定的抗体/抗原进行检测，该检测系统具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等优点。

主权项

一种用亲和素/链亲和素磁性复合微粒对生物分子进行免疫学检测的方法，该方法包括以下步骤：(1)抗体/抗原与亲和素/链亲和素磁性复合微粒的偶联将生物素化的抗体/抗原与偶联缓冲液混合，加入亲和素/链亲和素磁性复合微粒中，置于摇床，在4～37℃，100～300rpm条件下充分反应，反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；用缓冲液清洗后，磁性分离，弃上清；(2)封闭加入封闭液，在4～37℃，100～300rpm条件下，于摇床中反应1～2小时，封闭亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面未与抗体或抗原结合的空白位点；磁性分离，弃上清，用缓冲液清洗后，悬于保存缓冲液中备用；(3)与待测物结合当待检标本为抗原时，将待检标本，酶标抗体/酶标抗原加入步骤(2)的产物中，在4～37℃，100～300rpm条件下，于摇床中反应15～30min，使偶联在亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面的生物素化的抗体与之反应，双抗体夹心反应形成特异性生物素化抗体-抗原-酶标抗体的复合物；竞争法反应形成生物素化抗体-抗原复合物和生物素化抗体-酶标抗原复合物的混合物；用缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；当待检标本为抗体时，将待检标本，酶标抗原/酶标抗体/酶标抗抗体结合物加入步骤(2)的产物中，在4～37℃，100～300rpm条件下，于摇床中反应15～30min，使偶联在亲和素/链亲和素磁性复合微粒表面的生物素化的抗原与之反应结合，双抗原夹心反应形成特异性生物素化抗原-抗体-酶标抗原复合物；竞争法反应形成生物素化抗原-抗体复合物和生物素化抗原-酶标抗体复合物的混合物；间接法反应形成生物素化抗原-抗体-酶标抗抗体复合物；用缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；(4)检测向步骤(3)产物中加入显色底物显色或加入化学发光底物进行发光信号检测。