[发明专利]水稻愈伤组织质量评价方法

摘要

本发明公开了一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是：1)本评估系统以愈伤组织颗粒；2)颗粒指标；3)所描述颗粒散碎；4)愈伤组织色泽指标；5)所描述的5个颜色指标；6)愈伤组织水化；7)愈伤组织有分化趋势；8)颗粒指标的权重系数Pc＝15；9)颗粒系数的状态；10)愈伤组织色泽指标的得分系数；11)愈伤组织水化指标的得分系数；12)愈伤组织分化指标的得分系数：13)愈伤组织质量得分的计算；14)描述的CS值低于70以下愈伤组织质量较差，得分90分以上的愈伤组织适合农杆菌转化操作，有最高的分化率。建立了水稻愈伤组织的评价模型，评价结果和转基因效率一致，有利于实验和生产的评估，比较和质量控制。

主权项

一种水稻愈伤组织质量评价方法，其步骤是：1)、本评估系统以愈伤组织颗粒，愈伤组织色泽，愈伤组织是否水化，愈伤组织是否有分化趋势共四个指标做为评价指标；2)、颗粒指标(P)：愈伤组织颗粒根据愈伤组织生长的具体情况分为：a、颗粒散碎，硬度低；b、颗粒致密，硬度高；3)、如步骤2)所描述颗粒散碎定义为：愈伤组织的直径小于3mm，容易松散，不紧密，并且愈伤组织表面毛刺状不平滑，切片为愈伤组织断裂处多，愈伤组织边缘不清晰，切片观察，颗粒致密定义为：愈伤组织直径大于3mm的颗粒，颗粒致密硬度高，愈伤组织表面光滑状，切片观察为细胞致密，胞质密度高，愈伤组织边缘清晰，愈伤组织组织的顶层细胞结构明显；4)、愈伤组织色泽指标(C)：根据愈伤组织生长的具体情况分为五个等级，a、苍白；b、黄白；c、黄；d、深黄；e、褐，一块愈伤组织上出现黑点，这块愈伤组织的整体色泽特征定义为褐，愈伤组织上有出现苍白特征，这块愈伤组织整体特征将定义为苍白，愈伤组织有苍白特征则往往和水化特征相连，愈伤组织质地变软，细胞死亡；5)、如步骤4)所描述的5个颜色指标，以R，G，B颜色系统定义如下表：观察光源为日光灯管，色温：6500度，亮度500lux；6)、愈伤组织水化(H)：a、愈伤组织水化：愈伤组织出现发白，发软，惨白死亡的现象；切片特征为愈伤组织的表面层愈伤组织糜散；b、愈伤组织无水化：愈伤组织坚硬没有出现水软的现象，切片观察可见愈伤组织表层细胞层清晰，有明显的表层致密层结构；7)、愈伤组织有分化趋势(D)：a、愈伤组织有长出根状分化的特征，切片观察为愈伤组织表层愈伤组织的致密层变薄或消失，愈伤组织内部有跟源基发生；b、愈伤组织正常无分化趋势：切片观察愈伤组织表层有明显的致密层愈伤组织，愈伤组织内部细胞大小和结构均匀，没有明显的区域结构，愈伤组织分化趋势使得下一步的继代开始容易褐化，有分化趋势的愈伤组织转基因没有效率，侵染后很快死亡；8)、颗粒指标(P)的权重系数Pc＝15；愈伤组织色泽(C)的权重系数Cc＝25；愈伤组织水化(H)的权重系数Hc＝40；愈伤组织分化趋势(D)的权重系数Dc＝20；Pc+Cc+Hc+Dc＝100；9)、颗粒系数(P)的状态，颗粒散碎的得分系数P1＝0；颗粒致密的得分系数P2＝1，散碎颗粒所占的比值P1p，致密颗粒所占的比值P2p；P1p+P2p＝1；10)、愈伤组织色泽指标(C)的得分系数定义为：C1＝‑1；C2＝0.75；C3＝1；C4＝0，75；C5＝‑1；C1到C5分别代表苍白，黄白，黄，深黄，褐五种状态的得分系数，这5种状态所占的比例分别定义为：C1p，C2p，C3p，C4p，C5p。C 1p+C2p+C3p+C4p+C5p＝1；11)、愈伤组织水化指标(H)的得分系数：H1＝‑1；H2＝1，H1为水化愈伤组织的得分系数，H2为未水化愈伤组织的得分系数。这两种状态的愈伤组织所占比例分别定义为H1p，H2p；H1p+H2p＝1；12)、愈伤组织分化指标(D)的得分系数：D1＝‑1；D2＝1，D1为有分化趋势的愈伤组织的得分系数，H2为未出现分化趋势的愈伤组织的得分系数，这两种状态的愈伤组织所占比例分别定义为：D1p，D2p。D1p+D2p＝1；13)、愈伤组织质量得分的计算：CS＝(P1*P1p+P2*P2p)*Pc+(C1*C1p+C2*C2p+C3*C3p+C4*C4p+C5*C5p)*Cc+(H1*H1p+H2*H2p)*Hc+(D1*D1p+D2*D2p)*Dc；14)步骤13)描述的CS值低于70以下愈伤组织质量较差，分化率不高，很难进行转基因操作；得分在70‑90之间的愈伤组织已经适合分化，得到高的分化率，得不到高的转化率，很难转化成功，得分90分以上的愈伤组织适合农杆菌转化操作，也有最高的分化率。