[发明专利]一种寡糖分子疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种从细菌细胞壁多糖中提取具有免疫原性寡糖的方法，具体包括以下步骤：大规模细菌培养，收集细菌细胞，破裂细菌细胞，提取细菌细胞壁脂多糖，回收菌细胞壁脂多糖，去蛋白与核酸，去除类脂A，提取具有免疫原的寡糖分子。该寡糖疫苗具有种与属特异性，在免疫保护上不受地方流行菌株或不同血清型的影响，安全可靠，抗原性极为稳定，用量少、生效快、效果佳、维持时间长、实用性广等优点。

主权项

1.一种寡糖分子疫苗的制备方法，包括以下步骤：(1)大规模细菌培养将单一个纯的菌落自固体培养基上转种于适当量的液体培养基中，再将其逐级转种至各种大体积的液体培养基中，在适当的温度与时间进行培养；(2)收集细菌细胞用低温高速离心将细菌从悬液中沉淀下来；(3)破裂细菌细胞将细菌沉淀物，用EDTA将细胞破解，使胞浆内容物与胞壁分离；(4)提取细菌细胞壁脂多糖首先用热水将苯酚结晶配成一定浓度，并将胞壁溶液稀释，与等量苯酚溶液混合；隔水加热，间隔旋转震荡；然后置于冷环境中两小时，使水相与酚相分离，分别收集水相与酚相脂多糖粗制品；(5)回收菌细胞壁脂多糖两相脂多糖粗制品分别装在分子量2000道尔顿的透析袋内，先经流动自来水透析，然后，再将之置于蒸馏水透析，其间不断更换蒸馏水，透析后的脂多糖粗制品浓缩回收；(6)去蛋白与核酸剩余的少量蛋白质、核酸、脱氧核糖核酸，经蛋白酶、核酸酶、脱氧核糖核酸酶将之消化；经反复低温超速离心，可使脂多糖的蛋白与核酸含减少至最低程度；(7)去除类脂A用强酸、强碱溶液交替加热处理以及使用电化学方法使类脂A分子去除；(8)提取具有免疫原的寡糖分子用现代分子生物学和免疫化学的方法，从多糖中分离出具有特异性高、抗原性强的寡糖分子，再将其回收、浓缩、真空冷冻干燥。