[发明专利]细菌的[2Fe-2S]二羟酸脱水酶的鉴定和用途

摘要

发现了具有[2Fe-2S]簇的二羟酸脱水酶的群体。细菌的[2Fe-2S]DHAD被作为异源蛋白质在细菌和酵母细胞中表达，提供了用于使2，3-二羟基异戊酸转化为α-酮异戊酸和2，3-二羟基甲基戊酸转化为α-异亮氨酸酮酸的DHAD活性。异丁醇和其他化合物可以在包括了细菌[2Fe-2S]DHAD活性的途径中得到合成。

主权项

用于鉴定[2Fe‑2S]DHAD酶的方法，所述方法包括：a)用序型隐蔽马尔科夫模型查询一种或多种氨基酸序列，所述序型隐蔽马尔科夫模型是使用SEQ ID NO：164、168、230、232、298、310、344和346的蛋白质制备的，其中具有小于10‑5的E值的匹配提供了第一序列子集，从而所述第一序列子集对应于一种或多种DHAD相关蛋白质；b)分析步骤(a)的对应于一种或多种DHAD相关蛋白质的第一序列子集中三个保守的半胱氨酸的存在，从而鉴定出编码[2Fe‑2S]DHAD酶的第二序列子集，其中所述三个保守的半胱氨酸对应于变异链球菌(Streptococcus mutans)二羟酸脱水酶氨基酸序列(SEQ ID NO：168)的56、129和201位；以及c)分析步骤(b)的第二序列子集中特征保守氨基酸的存在，从而进一步鉴定出编码[2Fe‑2S]DHAD酶的第三序列子集，其中所述特征保守氨基酸的位置对应于变异链球菌DHAD氨基酸序列(SEQ ID NO：168)中的以下位置：88位的天冬氨酸、142位的精氨酸或天冬酰胺、208位的天冬酰胺和454位的亮氨酸。