[发明专利]用于免疫治疗的隐蔽HLA-A24表位的鉴定、优化和用途

摘要

本发明涉及一种方法，所述方法用于鉴定抗原中HLA‑A*2402限制性隐蔽表位并提高其免疫原性，以获得能够触发针对HLA‑A*2402限制性隐蔽表位的免疫反应的HLA‑A*2402限制性表位。本发明还提供由隐蔽或优化的HLA‑A*2402限制性表位构成的分离的肽。

主权项

1.获得HLA‑A*2402限制性表位的方法，所述HLA‑A*2402限制性表位能够触发针对抗原的HLA‑A*2402限制性隐蔽表位的免疫反应，所述方法包括如下步骤：(i)选择所述抗原中在位置2具有酪氨酸并且在次级锚定位置具有一个或多个不利氨基酸的9个氨基酸的肽，其中所述不利氨基酸选自由以下组成的组：位置1的脯氨酸以及C‑末端位置的谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸和赖氨酸；(ii)通过以下在HLA‑A*2402转基因小鼠中诱导针对步骤(i)所选择的所述肽的CTL：(iia)在150μg SEQ ID NO:112的表位存在下，用不完全弗氏佐剂乳化的100μg所述肽皮下注射小鼠，(iib)15天后，用10μM所述肽体外刺激5×107个脾细胞两次，以6天为间隔，(iic)在培养的第13天，测试团应答细胞群针对表达HLA‑A*2402并荷载所述肽的靶细胞的特异性细胞毒性；(iii)选择免疫接种的小鼠均不针对其产生CTL反应的肽作为天然的隐蔽表位；(iv)针对在步骤(iii)选择的每个天然的隐蔽表位，通过用精氨酸或赖氨酸取代所述隐蔽表位的N末端残基，和/或用亮氨酸或异亮氨酸或苯丙氨酸取代所述隐蔽表位的C末端残基，获得优化的表位；(v)通过实施与步骤(ii)相同的过程测试步骤(iv)所获每一优化表位的免疫原性，并选择具有在至少一只小鼠中引起CTL反应的免疫原性的那些优化表位；(vi)对于步骤(v)所选每一优化表位，测试针对所述优化表位产生的CTL是否也识别其同系天然隐性表位，并选择所述测试为阳性的那些优化表位。