[发明专利]由启动子调控两种目的基因表达的重组载体

摘要

本发明为由启动子调控两种目的基因表达的重组载体，提高重组载体对肿瘤细胞的钉伤功能。构建方法如下所述：①提取Survivin启动子基因，②提取人的细胞基因mRNA，反转录为cDNA，③在cDNA中扩增第一目的基因，④在cDNA中扩增第二目的基因，⑤将内切酶切开的Survivin启动子基因片断与基本载体分子用连接酶连接成第一中间载体，将内切酶切开的第一目的基因片断与第一中间载体分子用连接酶连接成第二中间载体，将内切酶切开的第二目的基因片断与第二中间载体分子用连接酶连接成第三中间载体，将用内切酶切开的IRES基因片断和第三中间载体用连接酶连接成重组载体，⑥将重组载体转染受体细胞，培养转染后的细胞，使重组载体分子随受体细胞扩增，筛选出含有重组载体分子的受体细胞。提取重组载体，检测其杀伤肿瘤细胞的能力。

主权项

由启动子调控两种目的基因表达的重组载体，其特征在于构建方法如下所述：①提取survivin启动子基因，②提取人的细胞基因mRNA，反转录为cDNA，③在cDNA中扩增第一目的基因，④在cDNA中扩增第二目的基因，⑤将内切酶切开的Survivin启动子基因片断与基本载体分子用连接酶连接成第一中间载体，将内切酶切开的第一目的基因片断与第一中间载体分子用连接酶连接成第二中间载体，将内切酶切开的第二目的基因片断与第二中间载体分子用连接酶连接成第三中间载体，将用内切酶切开的IRES基因片断和第三中间载体用连接酶连接成重组载体，⑥将重组载体引入受体细胞，转化或转染，培养转化细胞，使重组载体分子随受体细胞扩增，筛选出含有重组载体分子的受体细胞。