[发明专利]一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法有效
| 申请号： | 201010100107.5 | 申请日： | 2010-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN101914487A | 公开（公告）日： | 2010-12-15 |
| 发明（设计）人： | 黄俊成;赵云程;汪立芹;林嘉鹏;陈童;陈世彬 | 申请（专利权）人： | 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国—澳大利亚绵羊育种研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐新科联专利代理事务所(有限公司) 65107 | 代理人： | 欧咏 |
| 地址： | 830000 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | 本发明提供的一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法，将体外培养的绵羊囊胚，采用Tyrode’s Solution去除透明带后，接种于绵羊胚胎干细胞无血清培养液中，并用针头固定，置于38.6℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，培养中每48小时半量更换培养液，pH为6.8-7.2，原代培养7-9天；之后每3-4天采用常规机械法按1∶2-1∶4传代一次，即绵羊胚胎干细胞体外培养可传至16代。绵羊胚胎干细胞无血清培养液的配制：D-MEM/F-12+80ng/mL bFGF+3μMCHIR99021+10μL/mL N2+20μL/mL B27+10μL/mL NEAA+2mM L-Glutamine+0.2mM β-Mercaptoethanol。使用32号针头将裸胚固定于培养皿底部，避免损伤囊胚内细胞团并将裸胚滋养层细胞剥离。裸胚接种数量因以45-60枚/组为宜。该方法能使绵羊的胚胎干细胞原代集落形成率提高至33％(14/42)。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 绵羊 胚胎 干细胞 血清 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种用于绵羊胚胎干细胞的无血清分离培养方法，其特征在于：将体外培养的绵羊囊胚，采用Tyrode’s Solution去除透明带后，接种于自制的绵羊胚胎干细胞无血清培养液中；用针头固定内细胞团，置于38.6℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，培养中每48小时半量更换培养液，pH为6.8 7.2，原代培养7 9天；之后每3 4天采用常规机械法按1∶2 1∶4传代一次，即绵羊胚胎干细胞体外培养可传至16代。
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