[发明专利]一种同时检测32个单核苷酸多态性位点基因型的方法

摘要

本发明涉及一种同时检测32个标签单核苷酸多态性位点的方法。选择国际单倍型图工程数据库上公布的内收蛋白1，血小板内皮细胞黏附分子-1，C-反应蛋白，内皮固有型一氧化氮合酶，浆细胞膜糖蛋白1，L-选择素，G蛋白β3亚单位，血管紧张素I转换酶，血管紧张素II 1型受体，血管紧张素原，亚甲基四氢叶酸还原酶和肝脂肪酶基因中国汉族人群的32个标签单核苷酸多态性，每个单核苷酸多态性设计3条引物(2条PCR扩增引物和1条延伸引物)，通过PCR扩增、延伸及杂交，应用SNP Stream基因分型系统对单核苷酸多态性位点进行基因分型。本检测方法具有快速、准确、高通量、操作简单、微量化等优点。

主权项

一种同时检测32个单核苷酸多态性位点的方法，这些基因及32个标签单核苷酸多态性位点是内收蛋白1基因：rs3775067、rs1263359，血小板内皮细胞黏附分子-1基因：rs503550，C-反应蛋白基因：rs1205，内皮固有型一氧化氮合酶基因：rs7830、rs3918188，浆细胞膜糖蛋白1基因：rs12528076、rs858341、rs021966、rs858345、rs9308995，L-选择素基因：rs964555、rs2205848、rs4987318、rs2298900，G蛋白β3亚单位基因：rs5445，血管紧张素I转换酶基因：rs4333、rs4305、rs4353，血管紧张素II 1型受体基因：rs6801836、rs2675511、rs5182，血管紧张素原基因：rs1926722、rs7539020、rs3889728、rs493132、rs478523，亚甲基四氢叶酸还原酶基因：rs1801133、rs9651118、rs6541003和肝脂肪酶基因：rs12462668、rs10426971，其特征在于检测方法包括下述步骤：(1)设计并合成用于扩增32个单核苷酸多态性位点的序列1至序列96引物，每个单核苷酸多态性设计3个引物，其中2个为PCR扩增引物，用于扩增出含有目的单核苷酸多态性位点的片断；1个为延伸引物，用于单核苷酸多态性位点的测序及与玻璃芯片上的寡核苷酸链杂交；(2)稀释并混合PCR引物，对目标DNA进行PCR扩增；(3)对扩增产物进行纯化；(4)稀释并混合延伸引物，进行延伸反应；(5)杂交；(6)对杂交板进行荧光扫描，根据荧光信号判断单核苷酸多态性位点的基因型。