[发明专利]用于冠心病诊断的血管过氧化物酶ELISA试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于冠心病诊断的血管过氧化物酶ELISA试剂盒，发明人制备VPO1融合蛋白，以及抗人VPO1多克隆抗体，并在此基础上提供一种灵敏度高、特异性强、使用方便、快速的定量检测人血清、血浆、脑脊液或其他人组织匀浆中的血管过氧化物酶浓度的ELISA试剂盒。用ELISA方法直接测定样品中的VPO1含量，用于冠心病的风险筛查和诊断，该试剂盒检测灵敏度小于5.0ng/ml，剂量-反应曲线的线性相关系数＞0.980，具有简便、快捷、灵敏、准确的优点，为体外诊断定量检测血管过氧化物酶提供了有效的手段。

主权项

一种VPO1融合蛋白，其特征在于通过以下制备方法获得：以含VPO1基因的质粒为模板，根据原核表达载体pEGX-4T-2的GST阅读框架设计引物，使VPO1基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致，并使引物带有SalI和NotI酶切位点，进行PCR扩增，切胶后，经凝胶回收线性的4.9kb的VPO1编码区片段；用所述PCR回收产物及pEGX-4T-2载体进行SalI和NotI双酶切，产生匹配的粘末端，之后将pEGX-4T-2载体与VPO1基因连接，构建成符合阅读框的GST-VPO1融合基因；用含融合基因的pEGX-4T-2-VPO1质粒转化大肠杆菌BL21，挑选阳性菌落，提取纯化获得重组融合蛋白。