[发明专利]利用新鲜羊膜制备组织工程人工角膜内皮载体支架的方法

摘要

本发明涉及一种利用新鲜羊膜制备组织工程人工角膜内皮载体支架的方法，采用1∶1000硫酸妥布霉素液对新鲜羊膜进行浸泡消毒，经胰蛋白酶-EDTA消化液倒置消化后，用细胞刮刀轻刮羊膜上皮面以全部去除残留上皮细胞，获得去上皮层羊膜，平铺在培养板孔中牢固干贴后，用去上皮层羊膜专用包被液进行包被处理，吸出包被液晾干后即可作为组织工程人工角膜内皮的载体支架使用。本发明工艺科学合理，所制备的载体支架可批量生产，以满足组织工程人工角膜内皮规模化重建对载体支架的大量需求，为角膜内皮盲通过临床角膜移植而复明创造条件，且该载体支架制备方法应用于组织工程人工角膜内皮体外重建和临床治疗的成本低。

主权项

一种利用新鲜羊膜制备组织工程人工角膜内皮载体支架的方法，首先用眼科镊撕除低温保存新鲜羊膜的纤维细胞层和海绵层，用0.9％生理盐水冲洗干净后，放入1∶1000硫酸妥布霉素液中，置无菌操作台内浸泡消毒20～30分钟后，用无菌D-Hanks溶液漂洗3～5分钟；再依次采用倒置消化法和细胞刮刀刮除法制备出去上皮层羊膜，用打孔器将羊膜打成直径15.6毫米的圆片，按上皮面朝上平铺于24孔培养板孔中，放入5％CO2培养箱中、37℃进行干贴15～25小时；在无菌条件下向干贴有羊膜的24孔培养板孔中，按1毫升/孔的量加入去上皮层羊膜专用包被液，将培养板置37℃培养箱中包被处理15～25小时，再无菌吸出包被液，晾干后即可作为组织工程人工角膜内皮的载体支架；所述去上皮层羊膜专用包被液的配方为D-Hanks溶液和0.075‰～0.125‰IV型胶原。