[发明专利]一种快速的稚幼鱼甾类激素提取方法

摘要

一种快速的稚幼鱼甾类激素提取方法，本发明的技术方案首先将称量后的稚幼鱼剪碎，然后置于含有无水乙醇的研钵中研磨，再采用超声波粉碎；匀浆经离心后取得上清液，并加入5倍体积的二氯甲烷，经反复混匀后静置分层；去除上层的水相，将下层有机相置于45℃水浴挥发干净；最后用含有1％BSA的PBS缓冲液溶解，并于-20℃保存待用。本发明可用于稚幼鱼的各种甾类激素的提取，适用于多种鱼类神经内分泌调控研究。

主权项

一种快速的稚幼鱼甾类激素提取方法，将稚幼鱼组织破碎，再利用乙醇和二氯甲烷将其溶解，其特征在于具体步骤如下：步骤1、取新鲜的或‑20℃冻存的稚幼鱼，称量后剪碎置于研钵中；步骤2、按照每克鱼重对应1ml 50％乙醇的比例向研钵中加入50％乙醇，充分研磨后将匀浆液转入离心管中；再用上述50％乙醇体积2倍的无水乙醇冲洗研钵中残留的鱼组织，并一同转入离心管中；步骤3、匀浆采用超声波粉碎15～25秒；并在4℃下，6000～8000转/分钟离心10分钟，收集上清液；步骤4、将固相残余物与50％乙醇混匀洗涤一次，50％乙醇洗涤用量为每克鱼重应用1ml，再于4℃下，6000～8000转/分钟离心10分钟，收集上清液；步骤5、将上述两步骤中的上清液汇集，加入上清液5倍体积的二氯甲烷，反复混匀，然后静止分层；步骤6、用注射器吸除上层的水相，将含有机相的离心管置于通风橱中，45℃水浴，充分挥发有机相；用含有1％BSA的PBS缓冲液充分溶解，并放置于‑20℃保持待用。