[发明专利]以成熟胚为外植体的君子兰离体快速繁殖方法

摘要

本发明属于植物繁殖方法，具体涉及是花卉的无性快速繁殖方法，本发明所采用外植体脱毒、接种及愈伤诱导、不定芽的诱导、根的诱导、再生植株移栽等技术无性快速繁殖君子兰。取材不受季节限制，适合于农杆菌介导转基因，在一定程度上克服转基因沉默。以来源于10株成龄君子兰的成熟种胚为外植体的脱分化率及分化率均可达70％～100％；再生系数高，由原始的一块愈伤组织经反复继代可分化出几百株丛生芽；丛生芽生根率可达100％，移栽成活率高，可达100％。可以使不同品种的君子兰在相对短的时间内大规模繁殖出遗传背景相同、外观整齐的植株。植株移栽后生长状态良好，平均单株再生苗的成本低，适合产业化生产。

主权项

以成熟胚为外植体的君子兰离体快速繁殖方法，其特征是具体步骤如下：1).外植体脱毒、接种及愈伤诱导：取成熟果实中的胚，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡30～60秒，用0.1～0.2％(质量/体积)的升汞溶液浸泡2～5分钟，无菌水冲洗3～5遍，将裸胚上黄色致密的长度2mm的一端切下，接种在含2，4-D2～4mg/L、蔗糖3～4％(质量/体积)、琼脂0.45～0.7％(质量/体积)的MS培养基上，20～30℃每天40W日光灯照射8～9小时，40～50天继代一次，待黄色愈伤或者绿色膨大长到直径5mm时即诱导分化；2).不定芽的诱导：将生长状态良好的黄色愈伤或绿色膨大组织转接到诱导分化培养基：MS+KT(0.25～0.5mg/L)+2，4-D(0.75～1.5mg/L)+3～4％(质量/体积)蔗糖+0.45～0.7％(质量/体积)琼脂，40～50天继代一次，20～30℃每天光照8～12小时；30～40天见再生芽产生，继代4个月时从一块愈伤分化出200多株再生芽苗；3).根的诱导：再生植株转到1/2MS+NAA(1～2mg/L)+蔗糖2％(质量/体积)+琼脂0.45～0.7％(质量/体积)的生根培养基上，20～30℃每天10小时光照；4).再生植株移栽：植株生根后即可移栽，腐殖土121℃灭菌30～60分钟，移栽前将植株上的琼脂及杂物冲洗干净，7天浇一次透水便成活。