[发明专利]一种重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白的制备方法及其用途

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白的制备方法及其用途。本发明从培养的多主枝孢霉提取RNA，通过PCR获得多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白的编码基因后，构建变应原Cla h8蛋白的表达载体pET19b-Cla h8。经表达纯化及鉴定，证实制得的重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可与多主枝孢霉过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合，具有与天然多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白相同免疫活性。本发明方法制得具有生物学活性的可溶性重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白，能避免天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。制得重组多主枝孢霉变应原Cla h8蛋白可制备诊断和治疗多主枝孢霉引起的过敏性疾病的制剂。

主权项

一种重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：1)从培养的多主枝孢霉菌体中提取总RNA，通过RT‑PCR合成cDNA；2)合成引物：Cla h8‑S 5‑CCCATATGCCTGGCCAGCAAGCAA‑3Cla h8‑as 5‑CGGGATCCTTATCTGGTGGTGTAACCA‑33)以cDNA为模板，通过PCR获得多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8编码基因片段；4)将编码基因克隆入表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；5)采用缓冲液对rCla h8包涵体进行洗涤，将其提纯后，采用谷胱甘肽还原系统对其复性，获得重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8；6)免疫学方法鉴定重组多主枝孢霉变应原蛋白Cla h8免疫原性。