[发明专利]一种甲型H1N1病毒的恒温扩增检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种甲型H1N1病毒的恒温扩增检测试剂盒及其检测方法。本发明试剂盒包含RNA提取液、甲型H1N1病毒核酸恒温扩增反应液、甲型H1N1病毒阳性对照、阴性对照。本发明的检测试剂盒特异性高、灵敏度高；反应速度快，单个样本从样本处理到完成检测，仅需2小时；可同时满足高通量和低通量的样品检测，且整个反应过程不需要复杂的仪器。

主权项

一种甲型H1N1病毒的恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：包括下列组成：(1)RNA提取液：RNA提取试剂盒；(2)恒温扩增反应液：包括正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条交叉扩增引物、1×Thermolbuffer、MgSO4、dNTPs溶液、Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；其中：所述的外围引物分别为：包括正向外围引物、反向外围引物、两条探针、两条交叉扩增引物、1×Thermolbuffer、MgSO4、dNTPs溶液、Bst DNA聚合酶和无菌双蒸水；其中：所述的外围引物分别为：正向外围引物序列为5’-AATAACATTCGAAGCAACTGG -3’，SEQ ID NO1；反向外围引物序列为5’-AAATAGGCCTCTAGATTGAAT -3’，SEQ ID NO2；所述的两条探针的序列分别为：正向5’端Biotin标记探针5’-biotin- ATAATACCAGATCCAGCATT -3’，SEQ IDNO3；反向3’端异硫氰酸荧光素FitC标记探针5’-AAAAGCACAAAATTGAGAC-FitC-3’，SEQ ID NO4：所述的扩增交叉引物分别为：扩增反向引物5’-GATATGCATTCGCAATGGAATTCCTCAATCCTGTDGCCA-3’，SEQ ID NO5；扩增正向引物5’-TTCCTCAATCCTGTDGCCAGATATGCATTCGCAATGGAA-3’，SEQ ID NO6；(3)阳性对照模板：为含有甲型H1N1病毒HA基因片段的转录产物；(4)阴性对照：无菌双蒸水。