[发明专利]一种应用于核酸序列分析中的核酸聚合酶链式反应的改进方法无效
| 申请号： | 201010150337.2 | 申请日： | 2010-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN102220409A | 公开（公告）日： | 2011-10-19 |
| 发明（设计）人： | 陈农;马东杰;李文华 | 申请（专利权）人： | 上海毕欧桥生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12P19/34 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王巍 |
| 地址： | 200125 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种应用于核酸序列分析中核酸聚合酶链式反应的改进方法，通过向PCR反应体系中加入大量与水不相溶，密度比水小且沸点比水高的惰性溶剂将反应体系覆盖，来实现对聚合酶链式反应的优化，包括(1)PCR反应；(2)PCR产物的纯化；(3)PCR产物的检测等步骤。本发明操作简便，能在不影响核酸序列检测的前提下减小PCR反应中各种试剂的用量，避免直接稀释反应体系导致PCR产物检测时信号的显著下降，降低成本，有较高的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 应用于 核酸 序列 分析 中的 聚合 链式反应 改进 方法 | ||
【主权项】：
一种应用于核酸序列分析中的核酸聚合酶链式反应的改进方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)PCR反应：a、向PCR反应体系中加入大量与水不相溶，密度比水小且沸点比水高的惰性溶剂，将PCR反应体系完全覆盖，可将PCR反应体系的体积缩小，反应体系中各组分的浓度不变；b、将反应体系离心后，然后进行PCR反应，条件为：在75℃条件下预热3分钟；45个循环，每个循环包括：95℃变性10秒，50℃退火20秒，60℃延伸4分钟；(2)PCR产物的纯化：a、在PCR反应后，向反应体系中加入缓冲液，缓冲液成分为：2mmol/LMgCl2，80mmol/L Tris，pH值为9；b、采用乙醇沉淀法进行纯化；(3)PCR产物的检测，对PCR产物进行检测采用毛细管电泳核酸测序仪，获取检测谱图。
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