[发明专利]基于磁珠提取细菌基因组试剂盒及其提取方法

摘要

一种基于磁珠提取细菌基因组试剂盒及其提取方法，属于分子生物技术领域。试剂盒，包括溶菌酶工作液、细菌重悬裂解液、RNA酶工作液、菌体蛋白沉淀液、自研磁珠、异丙醇、漂洗液、DNA洗脱液。试剂盒中提供的高效溶菌酶工作液用于裂解革兰阳性细菌细胞壁。通过菌体蛋白沉淀液去除大部分残壁菌体及蛋白等杂质，再利用单分散磁性微球特异性吸附基因组DNA，仅需简单的漂洗步骤后，就可以将磁性微球上的基因组DNA洗脱下来。本试剂盒提取的基因组DNA产量高、纯度好、片段完整，适合于PCR检测、酶切反应、核酸杂交及构建文库等下游试验。

主权项

一种基于磁珠提取细菌基因组DNA的试剂盒，包括溶菌酶工作液、细菌重悬裂解液、RNA酶工作液、菌体蛋白沉淀液、磁珠、异丙醇、漂洗液、DNA洗脱液；溶菌酶工作液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐，PH值7.0-8.0、1-4mmol/L螯合剂、体积分数0.8-1.2％Trition-X-100，溶菌酶的终浓度为20-30mg/mL；细菌重悬裂解液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐，PH值7.0-8.0、1-4mmol/L螯合剂、50-100mmol/L Na盐、质量浓度2-4％的十二烷基硫酸钠和终浓度0.1-0.4mg/mL的蛋白酶K；RNA酶工作液：为核糖核酸酶A，其终浓度10-20mg/mL；菌体蛋白沉淀液：5-8mol/L胍盐、2-3mol/L Na盐，PH值6.5-7.5；磁珠：粒径1-2μm的单分散磁性微球；异丙醇：分析纯的异丙醇；漂洗液：10-20mmol/L Tris盐，PH值6.8-7.2、100-200mmol/L Li盐、1-4mmol/L螯合剂与无水乙醇按1∶3-5的体积比混合而成；DNA洗脱液：10-20mmol/L三羟甲基氨基甲烷，PH7.5-8.5。