[发明专利]一种高效抗氧化剂-马铃薯蛋白抗氧化肽的制备方法

摘要

一种高效抗氧化剂——马铃薯蛋白抗氧化肽的制备方法，属于农产品精深加工技术领域。本发明以工业马铃薯蛋白为原料，通过碱性蛋白酶Alcalase水解、酶解液微滤浓缩、Sephadex G15凝胶色谱柱分离、冷冻干燥等步骤，获得新型、高效的马铃薯蛋白抗氧化肽产品，肽结构分别为：YFE(Tyr-Phe-Glu)、NYKQM(Asn-Tyr-Lys-Gln-Me)和TY(Thr-Tyr)，抗氧化肽的相对分子量范围为100-1043Da。本发明所制备的产品具有较强的清除自由基能力，可以有效增加乳状液中脂肪的氧化稳定性，产品安全性高，且制备方法简单，可有效改善马铃薯蛋白的功能性质，对马铃薯蛋白的深加工和附加值的提高以及马铃薯的综合利用和产业链的延长都有重要的意义。

主权项

一种高效抗氧化剂——马铃薯蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于以工业马铃薯蛋白为原料，用水配制悬浊液，调pH后加入碱性蛋白酶Alcalase进行酶解，灭酶冷却，离心微滤，滤液经真空浓缩后用凝胶色谱柱分离，洗脱的组分经冷冻干燥得到三种马铃薯蛋白抗氧化肽，肽结构分别为：Tyr-Phe-Glu、Asn-Tyr-Lys-Gln-Me及Thr-Tyr，分子量分布范围100～1034Da；制备步骤为：(1)工业马铃薯蛋白原料：其蛋白含量大于或等于80％；(2)配制悬浊液：马铃薯蛋白粉加水搅拌，制成40g/L蛋白悬浊液；(3)酶解：酶解条件为：pH值为7.9～8.1，温度48～52℃，调pH后加入碱性蛋白酶Alcalase进行酶解，酶活为400000u/mL，酶/底物蛋白粉干基计以mL/g计为0.95/100～1.05/100，600-800r/min搅拌酶解1h，酶解结束后调pH到7.0～7.1；(4)灭酶冷却：将所得酶解液升温加热至80℃，保温15min灭酶，快速冷却；(5)离心微滤：酶解液经5000r/min离心25min，上清液过0.45μm微滤膜；(6)真空浓缩：透过液在真空度0.1MPa，温度45～50℃下真空浓缩至固形物含量50％以上；(7)凝胶色谱柱分离：以Sephadex G15为填料填充层析柱，以蒸馏水为洗脱剂平衡填充好的层析柱12～16h后备用；将检测器波长设定在280nm，取8～10mL步骤(6)所得的浓缩液加入填充Sephadex G15填料的凝胶层析柱进行分离，以蒸馏水为洗脱剂，流速控制在0.8～1.2mL/min，打开记录仪在记录仪上记录凝胶层析柱组分洗脱的信号，随着洗脱的进行记录仪记录下不同的洗脱峰，等到记录仪上记录的信号值和初始时的信号值接近时，平衡一个柱体积后结束分离过程，按照记录仪上记录下的不同洗脱峰分别收集相应的样品，得到不同分子量分布的组分，多次重复上样，将收集到的同一种组分合并；共收集得到三个组分，结构分别为：Tyr-Phe-Glu、Asn-Tyr-Lys-Gln-Me及Thr-Tyr，分子量分布范围为100～1034Da；(8)冷冻干燥：将得到的收集组分冷冻干燥，冷冻干燥真空度为10～30Pa，温度-30～-55℃，干燥时间48h，水分含量低于5％，干燥后得到的产品即为马铃薯蛋白抗氧化肽。