[发明专利]一种黑热病媒介白蛉种类的鉴别方法及其鉴别试剂盒

摘要

本发明涉及一种黑热病媒介白蛉种类的鉴别方法及其鉴别试剂盒。本发明的鉴别方法包括下列步骤：白蛉DNA抽提，所提取DNA进行PCR扩增，用限制性内切酶Dra I酶切，观察酶切条带，根据有无酶切及酶切片段判断白蛉种类情况。本发明的鉴别试剂盒包括白蛉DNA抽提液，PCR反应液，限制性内切酶Dra I及酶切缓冲液。本发明所提供的鉴别方法简单实用，试剂盒敏感性高、特异性强、重复性好，为基层展开白蛉分子学鉴定提供便利。

主权项

一种黑热病媒介白蛉种类的鉴别方法，其特征在于：包括下列步骤：(1)白蛉DNA抽提；(2)所提取DNA进行PCR扩增：扩增所用引物序列选自白蛉核糖体DNA第2内转录间隔区(rDNA‑ITS2)的高度保守区，引物的序列为：上游：5′‑CCT GGT TAG TTT CTT TTCCTC CGC T‑3′，SEQ ID NO：1，下游：5′‑CGC AGC TAA CTG TGT GAAATC‑3′，SEQID NO：2；PCR扩增产物进行纯化回收；(3)回收的PCR产物进行酶切反应：所用限制性内切酶为Dra I；(4)酶切后产物进行3.0％琼脂糖凝胶电泳，观察酶切条带，判断白蛉种类情况，判断方法如下：经Dra I限制性内切酶后，中华白蛉由于没有该酶的酶切位点，仍然是原片段的大小，约为450bp大小；亚历山大白蛉有4个酶切位点，分别在66bp；76bp；203bp；357bp处，有5个酶切片断；吴氏白蛉有2个酶切片断，分别在80bp，391bp处，有3个酶切片断；长管白蛉有一个酶切位点，在353bp处，有2个酶切片断，在不完全酶切时，则有3个酶切片断。