[发明专利]土霉素单菌落冷冻菌的制备工艺

摘要

本发明公开了一种土霉素单菌落冷冻菌的制备工艺，采用全麦粉3.5～4.5％、酵母浸膏粉0.1～0.3％、磷酸二氢钾0.1～0.3％、琼脂1.5～2.5％、余量为水的比例配制平板培养基，进行单菌落的培养，将培养好的单菌落制备成单菌落冷冻菌，通过摇瓶初筛和摇瓶复筛，选出生产能力强的单菌落冷冻菌，最终制备成生产用冻干管菌种。该平板培养基可以培养出菌落直径大、分生孢子数量多的单菌落。单菌落孢子悬液直接用于单菌落冷冻菌的制备，它减少了菌种在复壮选育过程中和制备过程中的传代次数，防止菌种退化，增加了保藏效果，最终达到提高工作效率和增产降耗的目的。

主权项

一种土霉素单菌落冷冻菌的制备工艺，包括以下步骤：a.平板培养基的制备：首先选用加拿大产地的小麦，逐粒挑选粒大、饱满、无虫蛀及无霉变的小麦颗粒，粉碎为80目以上制备成全麦粉，再按照全麦粉3.5～4.5％、酵母浸膏粉0.1～0.3％、磷酸二氢钾0.1～0.3％、琼脂1.5～2.5％、余量为水的比例配制平板培养基，将平板培养基经过灭菌倒入灭菌后的培养皿中；b.单孢子悬液的制备：取预先选定的出发菌种，接种3～5只茄瓶斜面，培养出发斜面孢子，然后选取外观质量合格的出发斜面孢子制成单孢子悬液；c.单菌落的培养：将单孢子悬液按10倍的浓度梯度稀释至10-7、10-8、10-9；将以上三个浓度的单孢子悬液分别接种到不同培养皿的平板培养基上，在温度为36～37℃、相对湿度为40～50％的条件下培养；d.单菌落孢子悬液的制备：选择菌落直径较大、白色、孢子丰满、边缘整齐的主型单个菌落，制成单菌落孢子悬液，分装在4只试管中，塞上棉塞、包好封口膜并编号；e.单菌落冷冻菌的冻存：将装好单菌落孢子悬液的试管按照编号顺序摆放在铝制的试管架上，浸入-70℃丙酮中预冻，再迅速放入-70℃的超低温冰箱保藏；f.摇瓶初筛和摇瓶复筛：取步骤e中单菌落冷冻菌中的其中2只试管，采用与生产相近的培养基和培养条件，进行单菌落冷冻菌的摇瓶初筛和摇瓶复筛，选出生产能力强的单菌落冷冻菌；g.单菌落冷冻菌的制备：根据步骤f摇瓶初筛和摇瓶复筛的筛选结果，选择与生产能力强的单菌落冷冻菌编号对应的另外2只单菌落冷冻菌试管，制备生产用冻干管菌种。