[发明专利]海洋甲壳类动物支原体培养基及分离纯化方法

摘要

本发明涉及到一种海洋甲壳类动物支原体培养基及支原体的分离纯化方法。其特征在于将支原体肉汤培养基、苯酚红和重蒸水灭菌后加入小牛血清灭活然后再加入新鲜酵母浸出液、葡萄糖溶液、醋酸铊水溶液和青霉素混合均匀得到所述的液体培养基；将支原体肉汤培养基、重蒸水和琼脂粉灭菌后加入小牛血清、新鲜酵母浸出液、醋酸铊水溶液和青霉素，混合均匀后将混合液倾注到灭菌平板上制成固体培养基。利用上述培养基进行海洋甲壳类动物支原体的分离纯化方法是在固体培养基上分离菌落，将分离的菌落置于液体培养基中进行培养生长后在放置到固体培养基上纯化，重复上述步骤直至得到纯化的支原体。本发明所分离出甲壳类动物体内支原体的成功率高。

主权项

一种海洋甲壳类动物支原体培养基，包括液体培养基和固体培养基，其特征在于：将支原体肉汤培养基      12.0～15.0g0.4-1wt％苯酚红       2.35～3.00mL重蒸水                470～600mL在pH为7.0-8.0、110℃-121℃的条件下灭菌10-20min，冷却至50-60℃后加入5-30mL小牛血清在56℃灭活30min，然后再加入10-40v％新鲜酵母浸出液5-20mL、5-10wt％葡萄糖溶液0.5-3mL、5-15wt％醋酸铊水溶液0.1-0.5mL和5-20mg/mL青霉素0.5-2mL混合均匀得到所述的液体培养基；将支原体肉汤培养基    12.0～15.0g重蒸水              470～600mL琼脂粉              0.94～1.2wt％在pH7.0-8.0、110℃-121℃条件下灭菌10-20min，待冷却至55～60℃后，加入已过滤除菌的小牛血清5-30mL、10-40v％新鲜酵母浸出液5-20mL、5-15wt％醋酸铊水溶液0.1-0.5mL和5-15mg/mL青霉素0.5-2mL，混合均匀后将混合液倾注到灭菌平板上制成固体培养基；其中，所述新鲜酵母浸出液的制备方法如下：称取高活性干活酵母，悬浮于2-6倍的蒸馏水中，在20-40℃搅拌5-30min后，在室温下发酵15-60min，然后加热至沸点，冷却得到发酵液；将发酵液以2000-4000rpm离心15-30min，取上清液，用NaOH调pH值至7.0～8.0，然后将上清液置于90～95℃水浴中10-20min；冷却后，再以7000～8000rpm离心15-30min，取上清液用0.22-0.45μm膜过滤除菌即得到新鲜的酵母浸出液。