[发明专利]一种纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的制备方法

摘要

一种纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的制备方法，属于酶的固定化及其应用技术领域。该方法过程为：以苯乙烯-马来酸酐共聚物通过静电纺丝法制备纳米纤维，乙醇水溶液预处理后再利用纤维表面的酸酐基团共价偶联β-D-半乳糖苷酶分子，得到固定化β-D-半乳糖苷酶。酶负载量可达20～30mg酶/g纳米纤维，酶活力回收率为45～60％，固定化酶重复使用21次后仍维持85％的催化活力。该方法简便易行，所得固定化酶易于回收和重复利用，可用于烷基半乳糖苷和功能性低聚半乳糖的合成，低乳糖奶的生产等领域。

主权项

一种纳米纤维固定化β-D-半乳糖苷酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)静电纺丝法制备苯乙烯-马来酸酐共聚物(PSMA)纳米纤维：将一定量的PSMA溶解于有机溶剂中，在室温磁力搅拌的条件下充分溶解制得浓度为20～40％(w/v)的电纺液；将电纺液吸入注射器内进行静电纺丝，控制注射器针头至接收板的距离为10～30cm，电纺液流速为250～1000μL/h，电压在15～50kV之间调节，制得PSMA纳米纤维，室温放置直至溶剂完全挥发；(2)PSMA纳米纤维的预处理：取PSMA纳米纤维在25％(V/V)的乙醇水溶液中浸泡15min以增加其亲水性，再分别用水和缓冲溶液冲洗；(3)β-D-半乳糖苷酶的固定化：用pH值介于2.5～8.0的缓冲溶液配制0.1～5.0mg/mL的β-D-半乳糖苷酶溶液；将乙醇处理后的PSMA纳米纤维浸入β-D-半乳糖苷酶溶液中，在4～25℃条件下于摇床振荡固定化0.5～15h；取出固定化酶用缓冲溶液充分洗去纤维表面未固定化的酶，最后浸泡在0.2mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中(pH4.5)，于4℃保存。