[发明专利]去细胞生物血管支架制备方法

摘要

去细胞生物血管支架制备方法属生物技术领域，本发明包括去污剂单独去细胞生物血管支架制备方法和去污剂-蛋白酶联合去细胞生物血管支架制备方法，经去细胞化处理的血管管状组织内未见细胞残留，同时经京尼平固定后的去细胞化的血管管状组织始终呈现管状结构，且组织内保留有大量的细胞外间质成分：胶原蛋白和弹力纤维，这些胶原蛋白和弹力纤维对维持血管的弹性和强度，以及种植在其上的细胞的粘附、迁移、增值、分化都将发挥重要作用，本发明为构建具有生理医学机能的组织工程化血管或其它管状器官充足的生物血管支架，提供了一种新的方法和来源。

主权项

去细胞生物血管支架制备方法，其特征在于包括去污剂单独去细胞生物血管支架制备方法和去污剂-蛋白酶联合去细胞生物血管支架制备方法，其中：(1)去污剂单独去细胞生物血管支架制备方法包括下列步骤：①无菌条件下，取新鲜或冻存的血管管状组织。②用含有抗生素的生理盐水，或磷酸盐缓冲液洗去管腔内外的血液。③结扎血管的一端，用注射器向管腔注入以磷酸盐缓冲液配制的浓度为1％的十二烷基硫酸钠和浓度为0.02％的叠氮化钠。④结扎血管得另一端，将上述血管管状组织置于含有1％十二烷基硫酸钠+0.02％叠氮化钠的烧杯内。⑤在烧杯内放入搅拌棒，将烧杯置于磁力搅拌器上，启动磁力搅拌器，调整转速为30转/分钟，室温下连续转动12小时。⑥取出血管支架，拆除结扎线，用磷酸盐缓冲液或生理盐水冲洗整个管腔，洗去残留的十二烷基硫酸钠和叠氮化钠溶液。⑦结扎血管的一端，用注射器向血管支架注入以磷酸盐缓冲液配制的浓度为0.3％的京尼平溶液，结扎支架另一端，将血管支架置于上述京尼平溶液内，4℃下固定4小时。⑧取出血管支架，拆除结扎线，用磷酸盐缓冲液或生理盐水冲洗整个管腔，洗去残留的京尼平。⑨经组织学检测合格后，冷冻干燥，环氧乙烷消毒后，储存于-20℃的冰箱内备用。(2)去污剂-蛋白酶联合去细胞生物血管支架制备方法包括下列步骤：①无菌条件下，取新鲜或冻存的血管管状组织。②用含有抗生素的生理盐水或磷酸盐缓冲液洗去管腔内外的血液。③结扎血管的一端，用注射器向管腔注入以磷酸盐缓冲液配制的浓度为0.25％的胰蛋白酶和0.02％的乙二胺四乙酸或其钠盐的消化液，结扎血管的另一端，无菌下，将其置于室温下消化30分钟。④拆除结扎线，用磷酸盐缓冲液或生理盐水冲走血管内残留的消化液。⑤将血管的两端与蠕动泵连接，蠕动泵的连接管内事先注入浓度为1％的十二烷基硫酸钠和浓度为0.02％的叠氮化钠。⑥启动蠕动泵，调整转速为25-30转/分钟，持续灌流3小时。⑦取出血管支架，用磷酸盐缓冲液或生理盐水冲洗整个管腔，洗去残留的十二烷基硫酸钠和叠氮化钠溶液。⑧结扎血管的一端，用注射器向支架注入以磷酸盐缓冲液配制的浓度为0.3％的京尼平溶液，结扎支架另一端，将支架置于上述京尼平溶液内，4℃下固定4小时。⑨取出血管支架，拆除结扎线，用磷酸盐缓冲液或生理盐水冲洗整个管腔，洗去残留的京尼平。⑩经组织学检测合格后，冷冻干燥，环氧乙烷消毒后，储存在-20℃的冰箱内备用。