[发明专利]一种Ⅳ型胶原酶含量测定方法

摘要

本发明公开了一种Ⅳ型胶原酶含量测定方法，涉及一种测定人体血浆、血清中Ⅳ型胶原酶含量的测定方法。该方法利用Ⅳ型胶原酶具有水解明胶的特异性结合位点，而血浆中存在的其它基质金属蛋白酶难以水解明胶，采用TNBS对明胶的水解产物进行显色，可以对人体血浆活血清中的Ⅳ型胶原酶进行特异性的定量分析。本发明能够准确、快速的测定到人体血浆或血清中Ⅳ型胶原酶的含量。

主权项

一种Ⅳ型胶原酶含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：a）分别准备空白管、标准管和待测样品管；首先向空白管、标准管和待测样品加入底物溶液，所述底物溶液为5mg/ml～10 mg/ml琥珀酰明胶；接着向空白管中加入样品稀释液，向标准管中加入标准品，向待测样品管中加入待测样品，所述样品稀释液为体积百分比为40mmol/l～60 mmol/l Tris缓冲液、5mmol/l～15mmol/l CaCl2、10μmol/l ～20μmol/l ZnCl2以及质量百分数为0.05%～0.1% 月桂醇聚氧乙烯醚混合而成，所述标准品为已知浓度的Ⅳ型胶原酶；最后向标准管和待测样品管中加入样品稀释液，在35oC～45oC水浴反应30～120分钟；b）在空白管、标准管和待测样品管中加入终止液终止酶切反应，再加入检测溶液A和检测溶液B，最后加入检测稀释液，在35oC～45oC水浴下显色反应30～60分钟，使其显色反应充分进行，所述终止液为质量百分数为0.05%～0.2% HCL, 检测溶液A为0.1M～0.5M NaOH，检测溶液B为质量百分数为0.01%～0.05% 三硝基苯磺酸，检测稀释液为双蒸水；c）各管冷却至室温后，取各管溶液至酶标板中，用酶标仪测定吸光度;d）以标准物的浓度为横坐标，测定出的吸光度值为纵坐标，绘制出标准曲线，根据待测样品的吸光度值在标准曲线上查出相应的待测样品的Ⅳ型胶原酶含量；或者用标准物的浓度与吸光度值算出标准曲线的方程，将待测样品的吸光度值代入方程，计算出待测样品的Ⅳ型胶原酶含量。